用猪GV期卵母细胞提取物诱导体细胞的表观遗传修饰的研究

Andyhigh

老板想做这方面的东西，自己是新人，挺愁的不知重何下手，但又想做点东西出来，望各位前辈给点建议···- Z0 q! \4 o' ?+ [
  y- F( F8 I4 a! P3 {
1.老板给了篇文章《Epigenetic reprogramming in somatic cells induced by1 x, v* o, x. d# W; @. K
extract from germinal vesicle stage pig oocytes》，是在DEVELOPMENT AND STEM CELLS上的，韩国人做的。文章的大致结构:a.准备成纤维细胞核和卵母细胞 b.对成纤维细胞进行通透处理，卵母细胞进行去卵丘细胞、去透明带和去核处理。 c. 用剩下的卵母细胞细胞质提取物对成纤维细胞进行诱导，检查发生重编程细胞的各种指标，如：形态  干性基因的表达  H3K9甲基化水平   d 接下来就是用诱导出的细胞，做各种实验  如通过SCNT技术，构建出重组胚胎，研究胚胎的各种表观遗传指标。  e  同时作者也构建了一种表达oct4-EGFP的成纤维细胞系，将其做为源头细胞，进行诱导分化，然后构建重组胚胎，与d中的重组胚胎做比较。 f  还将细胞 移植到了MII 期的卵母细胞内， 还涉及到了免疫组化···  总之这篇文章做的挺多的，挺全面的
: D+ H& ]% d6 {# `: |1 @! u# Y* V- t; I) G: w3 t
现在就是想问下  各位前辈  卵母细胞提取物诱导的大体趋势是什么   意义又何在  自己能找到什么创新点  能做什么样的有意义工作 ？  最近想把大致的protocol 写出来，发给老板看看
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望各位前辈  各位师兄师姐  给点建议···   不胜感激  

Andyhigh

附件里面是《Epigenetic reprogramming in somatic cells induced by
/ ?3 {- z* X: y' mextract from germinal vesicle stage pig oocytes》

Andyhigh

还想问下 表观遗传学 在细胞 和胚胎方面 各在的大致趋势,或是一些公认牛人认为的大体趋势是什么？？？  也有什么意义···

希望之光

你是是哪个实验室的呀？

Andyhigh

回复 希望之光 的帖子" }) z8 Y4 a% v6 b5 y3 _: U
( w& v$ P$ D1 t# D" E# [: s
合肥这边的，能给点建议嘛

461650833

回复 Andyhigh 的帖子0 {; F) Y0 r+ _) c3 w5 s
& q6 B% i% n8 b5 s4 U5 {. v% s; o
组蛋白的甲基化和乙酰化
5 G. J+ q/ ?" V1 q3 z' Y基因启动子区的甲基化
3 ^9 q+ B& X6 E# L: a* X2 S$ x5mC和5hmC
  V3 b% ~' r/ `' K6 R8 {这些都可以研究啊  

希望之光

回复 Andyhigh 的帖子" P8 H- z8 a0 s" s) u* L& m# s0 h+ Z
( J5 \3 l1 \# S. P3 A
这个不好做呀 我们这边具有人做，但是只是细胞通透这一关就很难把握，文章里的浓度都有问题

Andyhigh

回复 461650833 的帖子
% v9 n5 S8 H& E9 q( G2 A
. o; Z  r/ v4 U6 I谢谢啊，发现你经常回复我帖子。  不过你说的都是大方向，能具体点嘛？尤其是实验设计上能找到什么创新点就好了

Andyhigh

回复 希望之光 的帖子# N: l8 M' T, d) y& e% q
0 A! n2 g9 R$ t) y3 L) S) ?
毕竟是韩国人做的，想问下 你们做了多久了，大概做到了什么程度啊，我想提前预支下难度···

zhangweihwz

先把爪蟾卵母细胞提取物的技术程序看看，卵母细胞胞质物提取方法都是借鉴爪蟾的。