用猪GV期卵母细胞提取物诱导体细胞的表观遗传修饰的研究

Andyhigh

老板想做这方面的东西，自己是新人，挺愁的不知重何下手，但又想做点东西出来，望各位前辈给点建议···4 i5 V: a# F$ Y; ^) D
8 I  S& H- K1 Q9 b) m
1.老板给了篇文章《Epigenetic reprogramming in somatic cells induced by
5 M+ D/ W4 \+ M# m9 W; Rextract from germinal vesicle stage pig oocytes》，是在DEVELOPMENT AND STEM CELLS上的，韩国人做的。文章的大致结构:a.准备成纤维细胞核和卵母细胞 b.对成纤维细胞进行通透处理，卵母细胞进行去卵丘细胞、去透明带和去核处理。 c. 用剩下的卵母细胞细胞质提取物对成纤维细胞进行诱导，检查发生重编程细胞的各种指标，如：形态  干性基因的表达  H3K9甲基化水平   d 接下来就是用诱导出的细胞，做各种实验  如通过SCNT技术，构建出重组胚胎，研究胚胎的各种表观遗传指标。  e  同时作者也构建了一种表达oct4-EGFP的成纤维细胞系，将其做为源头细胞，进行诱导分化，然后构建重组胚胎，与d中的重组胚胎做比较。 f  还将细胞 移植到了MII 期的卵母细胞内， 还涉及到了免疫组化···  总之这篇文章做的挺多的，挺全面的
' Q- X& C$ o! W
# h3 z: W9 q' |% v现在就是想问下  各位前辈  卵母细胞提取物诱导的大体趋势是什么   意义又何在  自己能找到什么创新点  能做什么样的有意义工作 ？  最近想把大致的protocol 写出来，发给老板看看' n# a( [, p! s7 ?8 f- p
! ]3 _1 r% T0 s7 |# C5 O
望各位前辈  各位师兄师姐  给点建议···   不胜感激  

Andyhigh

附件里面是《Epigenetic reprogramming in somatic cells induced by- `) d- J+ a* g2 |4 q, b5 T' d  f
extract from germinal vesicle stage pig oocytes》

Andyhigh

还想问下 表观遗传学 在细胞 和胚胎方面 各在的大致趋势,或是一些公认牛人认为的大体趋势是什么？？？  也有什么意义···

希望之光

你是是哪个实验室的呀？

Andyhigh

回复 希望之光 的帖子
' J1 w/ N* ~5 b! L+ S* u
6 N% q* \: b. d6 P& g合肥这边的，能给点建议嘛

461650833

回复 Andyhigh 的帖子
) m: d; I% s1 p$ `& A8 t& T; u+ v& I0 L0 N7 R# n
组蛋白的甲基化和乙酰化* N5 W1 N" f( ~& v
基因启动子区的甲基化" a3 U; K& G" }, {7 \. g2 z" ^/ t
5mC和5hmC; C$ J" E8 Q! e
这些都可以研究啊  

希望之光

回复 Andyhigh 的帖子
& W" a( Z( Y0 h# ?: E4 U( N& w4 w- k5 B+ F: S
这个不好做呀 我们这边具有人做，但是只是细胞通透这一关就很难把握，文章里的浓度都有问题

Andyhigh

回复 461650833 的帖子
6 A  j& L- }; @% x, ]1 {6 ]6 n* X1 f5 Q( a; J
谢谢啊，发现你经常回复我帖子。  不过你说的都是大方向，能具体点嘛？尤其是实验设计上能找到什么创新点就好了

Andyhigh

回复 希望之光 的帖子6 R! s5 |6 ^4 Z3 }

3 R: I  y7 I( D. `0 k毕竟是韩国人做的，想问下 你们做了多久了，大概做到了什么程度啊，我想提前预支下难度···

zhangweihwz

先把爪蟾卵母细胞提取物的技术程序看看，卵母细胞胞质物提取方法都是借鉴爪蟾的。