特定启动子+GFP构建报告基因

pingzongyunlan

其实这个跟载体关系不大，跟你所筛选的启动子有关，我曾做过类似的实验，建议可以使用pEGFP-C1,将CMV启动子换成你所用的特定启动子，启动GFP的表达，同时还存在NEO筛选标记，这样就可以筛选稳定细胞株了~-2000-+100足够~扩增启动子时需要用基因组做模板，也就意味着存在一定的困难，建议你可以预实验一下，如果一次扩出最好，如果不行可以采用重叠延伸PCR或者其他方法来分步扩增~Good luck!

刘森泉

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谢谢建议！再请问下一般用什么载体构建比较好呢？

懵懂干细胞

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光是GFP好像是不太够的哦，有的细胞假阳性的表达GFP，后面会丢失的也有。当然理论上是越多标记基因越好，但是过大会给工作带来苦难，建议可以考虑加个抗性基因，NEO PAC等等，