电转试剂盒LONZA以及电转细胞与质粒比

缥飘实验员

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前辈好，请问有没有做过 H1和 H9 的电转，现在使用 lonza NucleofectorTM 2b device 仪器，0.22的杯子，细胞100万个，100ul体系。使用 A-023程序， 现在做了GFP  2ug、7ug 的电转实验，连 GFP 都没有转进去，零星的看见几个细胞。8 o1 L2 W4 I$ o" x! K& F$ _
1、转后接种到一孔六孔板上，细胞贴壁率很低不足20%，或者更严格的说只有10%，这个主要原因是细胞状态吗，还是操作有问题？对于这样需要融合度为多少合适，60%？80%，大概需要生长几天？还是电转前一天高密度接种第二天消化电转。消化我发现使用 TrypLE酶不容易吹打为单细胞，是不是 accutase 更好些？0 ~9 {% K- p/ v4 N
2、电转液为一般的盐溶液，是这边的实验室的 protocol，具体配置不知道，转别的细胞是没有问题的。使用 bio-rad 的仪器用 PBS 作为电转液，效率也挺好的。这个是不是需要自己摸索，有钱直接买kit 是不是更好？+ r  @, q2 C3 |( g' z
3、现在处于预实验，摸索条件做细胞梯度好还是质粒梯度更好？( p: C2 V2 B6 l
4、电转实验细节上有没有特别好的建议希望分享一下，+ t" ^8 w, o# U7 U% q3 R6 `
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