荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别?

lornalau

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- [- g. r0 ^# l9 N& {荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别是什么？什么时候用到荧光定量PCR的技术？

luyue6453

荧光定量PCR可以知道蛋白表达量，我是研究转基因的，用荧光定量可以知道转进了多少拷贝，

realff

PCR可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 。无论定性还是定量分析，分析的都是 PCR 终产物。2 b( S. \8 d$ M* ?% B) w
但是在许多情况下，我们所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量 PCR 技术应运而生。所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行， PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。

realyy10

下面控制温度那部分是一样的 ，多了个荧光激发和检测装置

realyy10

下面控制温度那部分是一样的 ，多了个荧光激发和检测装置

sszxlijin

回复 luyue6453 的帖子' |; n- ^0 S0 I- Z

) h  P( s& h+ ~6 {  `& X7 oPCR不能确定知道蛋白的表达量吧 很多是转录后翻译的。我遇到过，要做western才知道蛋白

zsg

大家都说很多了，简单点，前者更能准确检测RNA水平，好一点的文章基本用前者。具体差异比较一下两者的检测原理就好了
  c) v' K4 m5 A8 L: u2 q9 j

baicaikua

荧光定量PCR和普通PCR的区别就在于它是荧光定量的，荧光PCR的反应中加入了一种基团（一般包含在反应液中），这种基团包含荧光基团，DNA上一段正常序列和消光基团（其实不叫消光基团，那个字不会打，大概这意思吧），当 PCR扩增一次是这个基团会扩增上，然后TAQ酶会修复这个错误基团。同时切断荧光基团和消光基团的连接，这样荧光基团就能表现出荧光，并被机器收集，扩增的数量越多荧光信号越强。并且荧光信号的强度会通过曲线表现在机器上，通常荧光PCR会有一套参比，一般是4个 分别是已知浓度的阳性质粒，我这里用的是 E3 E4 E5 E6 。当把需定量的样本和标准参比一起跑荧光PCR，机器会根据参比的曲线和浓度和样本的曲线，推算出样本的浓度。这就是荧光PCR了。而普通 PCR跑完后一般就是跑电泳，测序（测序还需做测序PCR）和基因扫描了。