病毒感染fibroblasts后的问题

huangcong1988

我之前感染换ES培养基后，细胞全部脱落（前几天发帖，还附图片）。这次感染后，细胞没有脱落，每两天换液一次，到现在已经是第七天了，但是细胞形态还没有改变，而且也没有出现细胞聚集的情况，而且细胞里面很脏，孔板周围已经有一些细胞脱落（不知道是feeder还是感染后的细胞），孔板里面飘着一些亮的原点，而且细胞间隙有些沙子样地黑点，不知道是什么，换液前我会用PBS洗一遍，但第二天又有，请大家帮忙分析下，这个是什么问题。还有就是想问问大家，细胞这样还有必要每两天换一次液吗？感觉很浪费ES培养基啊。
( P/ a, e8 N% \+ E1 T0 h. O/ M另外，补feeder怎么补？加feeder培养基中和消化还是加ES培养基？因为我的ES培养基是KOSR，所以不知道在诱导过程中，培养基中有血清影响不影响

zerollx

回复 huangcong1988 的帖子- T* w. T& A* s% s8 {- [; ?
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估计是你的病毒量太大了，建议你每次做的时候都做几个梯度感染复数，病毒并不是越多越好，有时候低复数的病毒反而有更好的诱导效果。你指的补feeder不知是因为病毒原因死亡的缘由还是由于诱导周期过长，分泌活性降低的缘因。若是前者，你可以降低病毒量，减少细胞的死亡；若是后者，一般诱导周期不长（10天以内）的话可以不用补feeder，若是较长的话（10~20天），可到后期更换条件培养基，若是再长则可传代接至新的feeder上

zerollx

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估计是你的病毒量太大了，建议你每次做的时候都做几个梯度感染复数，病毒并不是越多越好，有时候低复数的病毒反而有更好的诱导效果。你指的补feeder不知是因为病毒原因死亡的缘由还是由于诱导周期过长，分泌活性降低的缘因。若是前者，你可以降低病毒量，减少细胞的死亡；若是后者，一般诱导周期不长（10天以内）的话可以不用补feeder，若是较长的话（10~20天），可到后期更换条件培养基，若是再长则可传代接至新的feeder上

axh

从你的描述中可以看出，你的细胞状态很差，状态差的原因有很多，你说细胞没变形，所以病毒滴度很高的原因似乎不太可能，分析一下其他原因，诸如培养液，培养环境，是否支原体污染等……

axh

我觉得你应该检查一下你的细胞感染情况，用免疫染色或PCR皆可，病毒感染后3天左右就可检测。
, Y- o. y7 y& K( o5 f另外，补加feeder可以这样：将MMC或辐照处理的细胞消化后用PBS洗涤，确保将feeder之前的培养基洗涤干净，然后用ES培养基重悬，再根据你需要的密度补加相应量的细胞。

184lj

用KOSR养转染的细胞确实会出现你所说的那种情况的；我补充feeder是在换液的时候加入的。