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病毒感染fibroblasts后的问题 [复制链接]

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优秀会员 金话筒

楼主
发表于 2013-3-31 19:44 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
我之前感染换ES培养基后,细胞全部脱落(前几天发帖,还附图片)。这次感染后,细胞没有脱落,每两天换液一次,到现在已经是第七天了,但是细胞形态还没有改变,而且也没有出现细胞聚集的情况,而且细胞里面很脏,孔板周围已经有一些细胞脱落(不知道是feeder还是感染后的细胞),孔板里面飘着一些亮的原点,而且细胞间隙有些沙子样地黑点,不知道是什么,换液前我会用PBS洗一遍,但第二天又有,请大家帮忙分析下,这个是什么问题。还有就是想问问大家,细胞这样还有必要每两天换一次液吗?感觉很浪费ES培养基啊。
3 `% s( M" D8 H. j另外,补feeder怎么补?加feeder培养基中和消化还是加ES培养基?因为我的ES培养基是KOSR,所以不知道在诱导过程中,培养基中有血清影响不影响
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沙发
发表于 2013-4-1 12:37 |只看该作者
回复 huangcong1988 的帖子  L' ^% p2 _6 g- x4 P' H
" V) G- U! B& B7 ~8 J' [. Y) K$ D
估计是你的病毒量太大了,建议你每次做的时候都做几个梯度感染复数,病毒并不是越多越好,有时候低复数的病毒反而有更好的诱导效果。你指的补feeder不知是因为病毒原因死亡的缘由还是由于诱导周期过长,分泌活性降低的缘因。若是前者,你可以降低病毒量,减少细胞的死亡;若是后者,一般诱导周期不长(10天以内)的话可以不用补feeder,若是较长的话(10~20天),可到后期更换条件培养基,若是再长则可传代接至新的feeder上
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藤椅
发表于 2013-4-1 12:41 |只看该作者
回复 huangcong1988 的帖子
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2 e, d7 u9 ~. `估计是你的病毒量太大了,建议你每次做的时候都做几个梯度感染复数,病毒并不是越多越好,有时候低复数的病毒反而有更好的诱导效果。你指的补feeder不知是因为病毒原因死亡的缘由还是由于诱导周期过长,分泌活性降低的缘因。若是前者,你可以降低病毒量,减少细胞的死亡;若是后者,一般诱导周期不长(10天以内)的话可以不用补feeder,若是较长的话(10~20天),可到后期更换条件培养基,若是再长则可传代接至新的feeder上

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板凳
发表于 2013-4-1 12:58 |只看该作者
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从你的描述中可以看出,你的细胞状态很差,状态差的原因有很多,你说细胞没变形,所以病毒滴度很高的原因似乎不太可能,分析一下其他原因,诸如培养液,培养环境,是否支原体污染等……
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报纸
发表于 2013-4-1 13:03 |只看该作者
我觉得你应该检查一下你的细胞感染情况,用免疫染色或PCR皆可,病毒感染后3天左右就可检测。; t8 O7 i( u. M9 V5 F. l
另外,补加feeder可以这样:将MMC或辐照处理的细胞消化后用PBS洗涤,确保将feeder之前的培养基洗涤干净,然后用ES培养基重悬,再根据你需要的密度补加相应量的细胞。
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地板
发表于 2013-4-1 17:31 |只看该作者
用KOSR养转染的细胞确实会出现你所说的那种情况的;我补充feeder是在换液的时候加入的。
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