E14 培养请教

sszxlijin

培养基是DMEM， 15%FBS， 100*glu， 100*neaa ，2-巯基乙醇， 100*PS， LIF。。。 使用0.1%的明胶包被。细胞密度大约7-10万/6孔板单孔
* D, m8 |& y5 c1）养的时候细胞克隆较小 而且容易分化 有时复苏一天分化就不较多。。。。。0 h9 J. x. x, s, y" C; X8 V# z
2） 还有最近发现有不明黑点。今天检测无支原体污染" J: R/ p+ y& O% j! m
细胞状态不是很好  求高手指教

zpzp0312

那是细胞质量的问题，来源应该不很理想; d$ d: y8 ~' N. @( P! h9 s
另外，其实有时E14表现比较差，但是做实验时也能得到结果，分化也能进行下去，甚至得到嵌合体

sszxlijin

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0 E* b9 Q9 R! A0 }5 U4 o细胞是别人给的，他自己养的还是挺好的

zpzp0312

你这是无饲养层还是有饲养层培养？

sszxlijin

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2 w' Q# A& y0 M& E
* j. r8 L5 k/ F* t, R$ Z1 Z无饲养层 明胶包被的

zpzp0312

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2 m) Q$ s* `6 q  R
& Y3 Q: h& a* h. y. s无饲养层培养有一定的难度，首先培养者的经验要足够丰富，其次细胞状态要足够理想，再次就是有些实验室有一些大家不清楚的培养液成分组成2 M2 h. c0 S) l1 ?: N2 S9 N" k- T  D
如果这个实验使用饲养层可以做的话，最好还是使用饲养层。当然，前提是不影响实验结果

mayiwaiwai

! x" {9 u! @: O5 |3 y+ `6 A
% t$ k3 e- v- H5 m& X, r
可能是细胞质量的问题，传代轻轻吹打，避免机械损伤，消化时间5分钟以内，这些对细胞都很重要。