求指点E14

sszxlijin

培养基是DMEM， 15%FBS， 100*glu， 100*neaa ，2-巯基乙醇， 100*PS， LIF。。。 使用0.1%的明胶包被。细胞密度大约7-10万/6孔板单孔
+ |# U1 t0 R! `6 r1）养的时候细胞克隆较小 而且容易分化 有时复苏一天分化就不较多。。。。。
# Y* c- n! G6 s% K" |2） 还有最近发现有不明黑点。今天检测无支原体污染$ z% n, b3 m  x: J
细胞状态不是很好  求高手指教& ?' l8 H1 Z% d) n" }* s
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3 w. z: R/ Q5 F  v  @/ N+ Z9 @# l: |

孙帅帅

细胞内部出现很多黑点表示细胞老化，培养基出现可移动的悬浮在培养基中的黑点可能染细菌了！ 我们曾经就遇到过染细菌~~

yangcy-smile

我在养E14的时候也出现过这个问题，开始的时候用gelatin包被后培养没有什么问题，体外增殖时间长了，就开始出现这种情况了。是体外培养的问题，用上滋养层恢复恢复就能缓过来，然后可以再次脱离滋养层。

一人日和

无滋养层，3i+lif也有点这样，生长缓慢，后来加滋养层长得就很好。黑点是不是瓶子上的呀

sszxlijin

回复 watchen198891 的帖子
( k6 n& S' [, U. z2 T+ d7 u; U2 P- S5 ]/ _3 T
不太像  一般到后来黑点一直在。也没见大范围爆发

sszxlijin

回复 mayiwaiwai 的帖子) ?# o$ W/ U: x+ H

5 \' j  W4 A0 `: `7 x% Y谢谢 我试试看看

watchen198891

出现黑点是不是细菌感染了

mayiwaiwai

回复 sszxlijin 的帖子! q, K  X* ^- E, t4 W
+ P/ I* A. P- \. s. ], ]
之前也是用这样的培养体系，细胞也是看着分化很严重，楼主可以做个染色看看ES标记，OCT4\SOX2看看有没有分化，有时候看着分化，但干性还是存在的，没有饲养层的是有这样的现象

sszxlijin

回复 山登绝顶我为峰 的帖子
. t) |: ~' G/ m5 x- G  p+ B+ p+ |3 X! P# x# |
一般老是过一天分化就会很严重

山登绝顶我为峰

感觉形态还不错啊