跪求：DAPI标记大鼠MSC

shagu

哪位前辈用过碧云天C1005的DAPI标记细胞？说明书上只有10ml规格，没有用量，用法，做过的前辈求教标记细胞的方法，用量！谢谢！

LiZhangRong

MSC-DAPI 标记:
( G3 s  q% `: a将无菌的DAPI 储存液(美国Sigma 公司) 加入培养的MSC 上清中,至终浓度为50 mg/ L ,37 ℃孵育染色至少30 min。细胞至少用Hanks 平衡盐溶液冲洗6 遍以除去未结合的DAPI。离心收集细胞,用无血清的DMEM 悬浮至移植所需浓度,置于冰上至少1 h 备用。DAPI标记细胞的很大不足就是当标记细胞死亡后，就可以释放出DAPI，将周围未标记的细胞标记，从而产生假阳性。
5 U, C8 c( Q! p: W

firstaider

干细胞移植常用的标记方法：
# j, `2 q' V3 t# L7 h1.BrdU，虽然会随时间而“稀释”，但一般在结束实验之前能出结果。如做免疫组化，注意抗原修复方法。
$ @% J) G' ]- C2.物种特异性抗原。如人的细胞移植到大鼠体内。可以测定人类特异性抗原如MAB1281( r3 N7 C5 V, o
3.雄性动物的干细胞移植到雌性动物体内，用原位杂交测y染色体" k& M" ?/ U+ ?7 B  V
4.荧光素标记

firstaider

回复 shagu 的帖子# a, ^9 K. w) f

/ }1 {4 u* p/ n" ^  O3 ]在细胞移植前，将DAPI 以一定的浓度加入培养基中，与细胞共同孵育过夜，用PBS 缓冲液漂洗至少6 次以洗掉未结合的DAPI，再用酶消化后离心收集细胞，加入DMEM 培养基制成细胞悬液以备用。
6 \1 C1 a2 O% H% C3 _: `3 ^  v存储条件：-20℃避光保存5 A1 `8 a* M1 s. y0 P
每次使用，用量较少，可反复冻融，无需分装
/ h3 |$ u: v, j. j7 l注意事项：
" H( |, P. x7 u8 V  I% N3 G5 p6 Y1、DAPI强烈致癌，操作时要戴上手套。
% e8 q& _9 E6 e2、贮存液用70%酒精配制，浓度100 μg/ml，可用黑纸包住，长期冻存。使用液按1:1000用PBS稀释，最终浓度100 ng/ml。
/ X9 L  G9 Y3 a* @: j7 j3 P3、DAPI是非常优秀的DNA染料，固定过和没有固定过的活细胞均可用DAPI染色。