求教：病毒与四因子

yaolinzhang

我做ips已经很长时间了，用的是tet-on慢病毒系统，但还停留于初期阶段。目前遇到两个棘手的问题在此请教：
- C, `/ J" p+ ~" N# [1.病毒滴度很低，浓缩后只有5次方？: K3 ]( {8 ~6 D$ Y' o. S6 d/ q. o8 l
2.由于病毒系统本身无GFP且是四个独立的因子，故难以保证OSKM全部转入靶细胞，不知可有较好的方法确保全部转入？
# c; [: Y. q4 r2 l- v6 j: C8 g" k望高手不吝赐教，诚谢！

canyon

用新鲜的病毒也不行吗？

Jonathan

回复 liuyul03 的帖子0 u* }. N3 E. k
; ?, A" W$ c+ ?' O/ l  |( G
好像是从addgene买的。你可以搜一下他们公司网站

huangcong1988

回复 yaolinzhang 的帖子$ m0 Y2 v( n& }9 A9 {: q% M: B$ T

$ p/ l$ y& L: v1 \0 D还有浓缩以后病毒滴度应该是很高的，浓缩的话，能将病毒浓缩大概15倍，包装的滴度为10的6次方，那么浓缩后就可能是10的8次方了。

huangcong1988

回复 yaolinzhang 的帖子% E3 Y! d  N1 A! C" \' Z
# ^: i9 J1 ^# ^/ k0 v
我也正纠结呢，我是带荧光的载体，包装病毒时候，EGFP表达，而且荧光强度很亮，但是感染靶细胞以后就几乎没有观察到GFP了（感染293T还是很亮的），但是有个有意思的发现是，把感染后的细胞消化接种到6孔板中，过两天荧光强度还行，不知道这个是怎么回事。

liuyul03

回复 Jonathan 的帖子1 h( s! i2 ^2 p1 |7 |
& S/ O1 h' O; E, [
哪里能买到？给个链接吧，谢谢！

yaolinzhang

回复 varing 的帖子
" q% I2 h: X4 T" P% M, ?7 f: v% q- ]3 u9 }
非常感谢！

varing

回复 yaolinzhang 的帖子" L% u/ }7 {$ @

; f  t1 e% y. M: R6 y" W7 D5次方。。。加大超离病毒量，用超速离心来浓缩吧。对于是否OSMK都进入同一个细胞的问题，除了使用四个因子串在一起的慢病毒，其他的方法还有提高感染效率（当然就是要病毒滴度够高），保证MEF90%以上感染了。关键就是病毒滴度问题。

Jonathan

去买那个4 in 1的质粒，那样效率会好很多。

yaolinzhang

回复 goblinwang 的帖子0 M3 x1 S1 n" U- p
/ X- Y+ O5 v5 ^& f. A) Q
谢谢！OSKM是Yamanaka四因子，做ips的。