G418细胞筛选

海星儿

养细胞菜鸟请教各位大神，为什么我做G418药筛的时候，给药的第二天就会出现细胞全部死亡，而且是300、600、700、1000ug/ml这样间断的几组（两个复孔都是），前后做了两次都是这样，实在是想不通，希望各位指点迷津

yaolinzhang

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/ s+ Z1 K& e& q- R6 u0 i) m1 K5 X) e* K* p: o
我能想到的原因：
3 C0 A8 F6 ]- p3 g: p      G418稀释是否合理，即浓度单位有没有搞错，我们用600ug/ml;
+ G9 d. |& w: S4 M0 [      细胞状态是否良好
+ I9 ^: b$ ^3 g; k7 C. J

我爱火热的冬天

建议你再重复一遍，看看是否还是这种情况，一般来说是自身操作或者实验的偶然性造成的

海星儿

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" o' i3 x1 Z' Q$ e$ D4 G8 k) d
( p' V) B% e% _; h9 z已经重复两次了，我会再试试，谢谢

海星儿

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8 s6 f3 ~, x* K$ G, T. \: G
2 k. {5 R: Z2 S- J. n( T/ R也是ug/ml级的，谢谢，我会再试一次

zpzp0312

你要试一试不添加G418细胞会不会死亡6 Q- l: z5 F- m7 ^# _: z
正常情况来说，添加G418后的最初几天是看不到细胞大量死亡这个情况的

cheetah2020

G418是分选抗性细胞的手段，如果没有抗药基因的表达，细胞当然都会死亡。1 Y" F# |% e- e* I! H) R" v& @2 ?  [
如果是长时间筛选，正常情况是绝大多数细胞死亡，只有少数稳转细胞克隆存活。' ~; L/ o5 X( I  k  p
但瞬转细胞不会很快死亡，所以还是先验证一下你的转染系统吧。

wangzhiqi86

致死曲线做过没，而且楼主也没说清楚你是什么细胞，每个细胞的耐受度不一样。转染是否真的成功了也需要进一步考察。

MZzhang

你可以减少观察细胞的间隔，24小时死亡的话，加G418后，每隔几小时，就看看生长情况

hinamo

不同的细胞对G418敏感程度不同，如果你能找到其他人用这种细胞时的G418浓度，应该在那个上下试试。
7 G4 g$ A1 J2 R$ u2 a! D另外，也可能是你的转染方法对细胞毒性大，可以换一种试试。