病毒包装

小咪咪

最近在学习包装病毒，但怎么也包不出来，求高手解救~

我爱火热的冬天

我也在包病毒，目前空载体可以包出来，连接了目的片段就包不出来了，也在探索中，不知道你包不出来是哪里原因，我们的经过我师兄送公司检测应该是我们的穿梭质粒出问题了，于是又重新弄了一套重新连接，郁闷呢

zhouleiwang2

大概注意调节核酸、衣壳蛋白的浓度和相对比例，控制好包装体系的离子浓度等等，可以参考一些前人体外包装TMV等病毒的文献，应该也可以在网上相关的protocols。以前学过一些，许久不用多已遗忘。

zhouleiwang2

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monk125

学习下 之前包装过感染小鼠细胞的病毒

tjbiohf

你包的是逆转录病毒？还是慢病毒呢？是不是help vector出了问题？

小咪咪

回复 tjbiohf 的帖子2 e) I6 e. d* J! J' ]" c

3 [* |, ^( k! _. |% M- o, M! A+ B我包的是慢病毒呢，而且不知道为什么包的时候有荧光，但用于感染就没有了。是质粒有问题还是什么别的啊？或者我没有注意什么细节吗？求解答。谢谢~

tjbiohf

包的时候有荧光是因为目的质粒上有GFP,目的质粒进入细胞后表达，所以你能看到荧光，你用的是二质粒系统还是三质粒系统？磷酸钙转染还是脂质体？能再说的具体点吗？还有收病毒后你超速离心吗？

小咪咪

回复 tjbiohf 的帖子6 o9 a1 m4 ]. S( Q* f( i4 g  p. S

5 m4 k5 h: P: x1 s# Y, P) c  P我用的是三质粒系统，应该是脂质体的，具体还不是很懂，因为是刚刚开始学的。收病毒时用的是1100rmp  3min，算超速吗？

我爱火热的冬天

回复 小咪咪 的帖子' j+ s/ {* a7 }( _! d
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包装的时候有荧光石因为带EGFP的穿梭质粒进入了细胞，并在细胞中表达，但是这并不代表完成了病毒的包装，你只感染穿梭质粒也会发荧光的，而感染后没有荧光说明你的病毒没有包出来。具体你没有包出来是有很多原因的，自己分析分析，查找一下可能出现的问题。