关于干细胞培养过程中状态保持的问题，怎么可以减少分化

qq007www

如题，各位大侠，实验室培养胚胎干细胞时，时会有细胞分化出现，十分恼人，想请教一下各位大虾怎么样在培养过程中保证ES的状态，让其不要分化。保证好状态。有什么细节需要注意。

星光灿烂

我觉得偶尔的分化是因为培养的条件有细微的差别，如1 w5 X7 c: |( G
1、添加因子（如bFGF)的批次不同，厂家不同，
. P4 [& S2 ~/ h% y% N6 j2、一次传很多的细胞系，传代的时间延长，影响细胞状态' j/ O9 {) W' ~
3、培养箱的状态，更换培养箱，或者水干了没有及时换
9 d; r' s. D1 H6 C4 W2 k6 @4、消化酶时间长了失活等等

qq007www

回复 星光灿烂 的帖子( Z+ T4 g$ n2 o1 x
2 [9 Y# }4 e$ [! z1 u
好的，我回去注意一下细节，看看会不会有好转

memory

添加8ng的bFGF可以明显降低分化率，但长期培养这样不好；
" ^+ C. F8 d  w5 O; V传代时吹打太过也会影响状态和分化率；9 L8 c% _" L/ V
定期机械剔除分化的细胞；
# m( N% C$ Q) J2 X最后，有分化才是正常的，无分化是不正常的。

linlicau

qq007www 发表于 2013-7-24 16:08 , F% o* ^" N7 X4 T
如题，各位大侠，实验室培养胚胎干细胞时，时会有细胞分化出现，十分恼人，想请教一下各位大虾怎么样在培养 ...

/ Q: a+ H6 k, o, S% {
最重要的是MEF的制备。一个好的MEF，不管你的初始细胞是怎么样的，都会很容易养好。
5 {! N, k3 Z5 v. v* J其次是传代时注意轻柔，不要吹吸次数太多等等。
% Q- ^$ @9 J$ Y! a3 [& C* P, l
) f' n! M4 M3 \1 d9 G) ^! d

panzz76

各位大虾，请指教小弟一个问题2 j+ ]* W. q) K3 f6 b
我是做生殖干细胞研究的，用的是STO做饲养层，按常规丝裂霉素处理，但在养生殖干细胞的过程中，感觉STO越来越多，而没有什么干细胞存在，看各位大虾，有些是不用饲养层来培养干细胞的，我自己也查了下，有专门的无需饲养层的干细胞培养液，但主要是ES或IPS的专门培养液. j* u9 n' M; h" H* h+ [; d5 y+ p0 z
所以，小弟好郁闷，不知养ES的培养液能否用来养我的生殖干细胞，大家有这方面的经验吗
" ~9 [2 A  D$ v- G- d急盼指教，谢谢先% l! R- J4 x, R4 @! A) q$ c. D