谁有悬浮细胞球培养经验

fengjh100

悬浮细胞球大多培养的是干细胞，不同的干细胞处理方式有所区别，假如是肿瘤干细胞（CSCs），那么采用血清剥夺法培养时在成球前一般需要换1-2次液体，3-4d换一次；此后，在球体初步形成时，就不要换液了，加液即可，加液到一定程度，感觉培养基中背景较深或细胞需要传代时，就需要离心，一般采用纯化、离心、消化、吹打等步骤，离心可以采用500转/3min。记住，消化细胞球体要重视，不然细胞状态不好。另外，吹打30-50次之间合适。不知我回答是否满意。如培养神经元干细胞，心肌干细胞等，那么处理方式又有不同。! \5 ?) ]$ W; U0 s2 S

fengjh100

甭客气，都是同道中人，望多交流。

fengjh100

因为是悬浮细胞，不能凭空评定多少细胞数量，看密度只能靠经验和感觉，比如加了有6-8ml的培养液了，里面细胞球团也分布不少了（要根据细胞分布的空间密度），差不多每个高倍视野有10个以上的球团了。那么就可以传代培养了。当然如有自动计数器就更方便了，虽然麻烦些，但计数更精确些，一瓶细胞假如是T15的，个人感觉200-300万即可传代。大瓶的迭加数量吧。希望我的经验能帮到你。

fengjh100

不好意思，近期由于实验繁忙，没有及时到这里回复，见谅！
1 ]0 B2 Y8 i. w  T1 P; T* k出现贴壁的情况还是比较常见的，一般是饲养环境所致，部分是饲养时间过久，细胞老化所致。解决办法有：1是用3D培养，其实可以简略些，用琼脂糖铺底板，这个经验坛子里说明的已经很多很常见了；2是加入一些抑制分化的因子，如白血病抑制因子等。传代的判断不好界定，靠经验吧，摇动后发现絮状沉淀比较多的情况下，需要及时传代了。建议细胞成熟后及时使用，尽量不要传代，因为可能出现变异。且状态不良。每天都尽量摇动悬浮的细胞，可以避免出现不均的情况，也可促进其球体形成。. Y* u/ {; T  ^& J0 N