转化后的大肠杆菌涂板长不起来

妖妖空

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$ ?: R8 N: }% A) c9 f9 V不知道是不是你的表述不清楚，这个取200ul是怎么做的，大肠杆菌是DH5α吗，我们的一般操作是，转化后先要摇床培养3个小时（EP管立着放），然后离心，倒掉上清，管中留下约100ul，然后吹打重新悬浮，然后全部吸取用来涂平板，不知道你的取200ul是不是这个操作。
& k. y+ j8 R8 |  M- J不过我认为你可以把液体培养基中长出来的菌，取点出来涂在板子上看看长不长，要是有单菌落的话，你可以做个菌落PCR鉴定，要是没有的话，那可能就是固体培养基有问题了。因为既然液体LB中有菌生长，（排除污染的可能）说明已经转成功了。

妖妖空

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我是这样想这个问题的：( o" j" @! D" c2 W
现象：转化的大肠杆菌在平板上没有菌落，而在LB液体培养基中有大量繁殖；7 j  _, Q2 @' X4 C: n, E
1、确定液体LB中的是不是目的重组子（也有确定是不是污染），涂平板（如果能在先前的板子上长出菌落来，说明液体LB中的菌本身就有问题了），看菌落形态，做个菌落PCR。所以我觉得第一步要确定液体LB中是不是有污染。
+ G$ R) z0 q9 B. z  z2、我说的固体培养基有问题是在上述条件成立的基础上，即LB中的大肠杆菌中有目的重组子。
3 r2 z$ T; F6 k. @2 {" y3、至于你说的同时接固体和液体培养基，我也没有说要这样做，我只是说在解决这个问题的时候可以这样做，本来挑选阳性克隆都是涂板子选单菌落的。（涂平板是稀释，方便单菌落的挑选，液体培养一般都是增殖培养，大量获取）8 S! \, {8 t9 K  o
4、你没有发现LZ做转化用的是单个标记吗，一般都是载体和受体上采用不同的抗性或营养标记来进行筛选的，即使这样都有假阳性的。+ M* g. a+ Y" n