CIK培养加液时机问题！！！

lyj-0017

我们都知道，CIK自培养开始至第三天或者第四天时，细胞数量一般有所降低，
/ X" R5 P7 m) Q2 o6 r( X   如果是在培养瓶中培养，此时可以根据取样计数结果选择换液，操作比较方便；6 Y5 L/ ~6 O  r$ K9 M) E' }
   但是如果开始就在培养袋中培养，培养至第三四天的时候应该如何加液呢？如果直接加液的话，此时的细胞密度应该会比初始浓度更低了吧？如果根据取样计数结果换液的话，是否会增加污染几率呢？

cjsbaicai

说是第三天，实际一般是隔天补液。培养袋一般都配有取样口，和补液孔是分开的，口头有橡胶塞封住。取样和补液时注意酒精棉擦拭或者酒精灯附近操作就行

lyj-0017

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' }# c# I& ~, Z+ ?0 E( w比如加入袋子的细胞密度为1.0x10^6/ml，到第三或者四天时，细胞密度应该有所降低吧？这时如果加液的话，细胞密度不就更低了吗？细胞后期还能长得那么好吗？9 n# S5 O9 P! S) V* ^" m
另外，你说的隔天补液，比如今天上午9点补的，那下次应该到明天上午9点补，是这样吗？
- [- t. Z3 w9 A3 c: [7 |多谢啦~

xu_shufen

在细胞培养袋中培养CIK细胞如何补液：淋巴细胞在细胞因子作用下，进行增殖、分裂，同时消耗培养基中的养份，代谢出许多废物（比如CO2）。另外也分泌出许多细胞因子，这些细胞因子也有对细胞增殖、分化有益的，所以补液时要根据细胞的密度，要观察培养液的PH，当细胞密度超过一定数量后，培养液变酸，不利细胞生长。所说几天补液，只是许多做过CIK细胞的经验说法，真正培养细胞要测定细胞密度，经验多了以后也可肉眼观察。另外培养液中大多有酚红，也可通过观察培养液的颜色进行补液。还有并不是营养越多越妈，当细胞密度太低时细胞反面生长状态不良，这里也细胞和细胞之间、自分泌、旁分泌作用。

jiefengbing

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3 m, q8 v' R8 {; p2 G  l你说的细胞数量降低是指去除了诱导DC的那部分吗？

lyj-0017

回复 xu_shufen 的帖子% H* q. r# q! ~8 z+ T3 I( W+ X
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你说的很有道理，细胞培养是一个动态过程，如果不经过严格的指标监控，初期也只能通过经验进行补液。你说的“细胞密度太低时，细胞反而生长不良”，这种现象也确实遇到过，细胞初期长得不错，加液之后感觉细胞很稀，后期就不怎么长了，这也是个教训吧。8 O/ n* Z. p' W; h, E3 @# p3 L2 H
那你们是如何加液的呢？加液之前先取样计数再加吗？细胞密度应该多少为宜呢？8 j9 t2 e' i0 a; n7 z! F9 H
多谢了！

lyj-0017

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# o) a1 r5 y$ \4 ?8 V' S1 r不是去除诱导DC那部分，是诱导CIK的那部分MNC培养过程中会死掉一部分，包括单核细胞、巨噬细胞之类

weijunning

一般在头三天不会有很大的减少，大部分都处于相对静止期，细胞数没有增加也没有降低；一般从第四天以后就开始呈现逐渐上升的增长趋势。我们都是做过很多样本的生长曲线的。

jiefengbing

回复 weijunning 的帖子& N$ M6 N# Y7 S* h. L. F/ y" b
( n7 B, `: f' u: \8 ]$ J
那按照您的说法，头3天不需要补液了，等大量生长的时候补液即可。

weijunning

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- t1 _  {- s1 z& ]9 s0 y& I" t( w是这样的。一般头三天不用管，三天之后再视情况进行操作。