转染率问题

lmh_yixue

我们请公司包装了慢病毒做A细胞的转染，发现第5天就出现了克隆样细胞，目前第11天，克隆已经很大了，想知道如何计算一下这种细胞的转染率是多少？是否有意义？比如我们转染了4*105个细胞，以1:10转染，最后获得的iPS细胞微2*105个，那么转染率是否是50%？还是用绿色荧光蛋白来算呢？" c$ ?7 S& t# S4 [. s- z; y' ]% \) ~$ t
谢谢！

limeiying

1:10具体指什么呢？转染前细胞数量：（病毒滴度×病毒体积）=1：10？

lmh_yixue

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( L7 z3 @6 `; z- o! l4 n- |' s" }# t% p# t/ g( C$ @- }) N' m
MOI值，即细胞数目：病毒数目=1:10

sun_happone

应该是用绿荧光蛋白来算，可以通过流式检测，以没有经过慢病毒转染的细胞作为阴性对照。

neuralstem

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, _9 I4 \' Y6 \( C, M+ W$ |1 G7 }$ S% `- O% t
No....转染细胞过程中， 有细胞死亡， 也有细胞繁殖， 所以不能简单的用positive cell number/beginning cell number来算转染率。
: w. [! [- X( I- ^) G6 J) b  k) Z( C0 \$ Q1 v
正确的方法应该是看转染也后有多少百分比的细胞表达报告基因（GFP). 方法用flow cytometry。 如果细胞不能trypsinize的话，就需要在confocal microscopy然后镜下数细胞了。
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- T! H# o  S0 q, J( r# r' `; J. N如果直接看看不到的话， 建议用抗体染一下。
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neuralstem

' P8 r. z# t- l& t! Z1 ^) F* q

) H" z( l- E2 d  k1 E回复 sun_happone 的帖子
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用未转染的细胞做对照是不对的。 lentivirus有毒性。 未接触lentivirus的细胞当然状态好， 数量多。 / X+ i3 m/ Z9 F0 P2 p7 ~
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正确的方法应该是用control lentivirus（比如空载体）做对照。 不过我觉得不用， 直接用lenti-GFP转， 然后看有百分之多少的细胞表达GFP就可以了。

sun_happone

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7 x0 t$ i1 I: P; ]9 U2 o
1 N. n0 r# D( g& C9 Xo ,谢谢，学习了