冷冻脐血细胞体积多少？

luyue6453

最近想提取脐带血单个核细胞，不知道冷冻体积多大合适，提取细胞数量好像很少，不知道加多少冷冻液，再者想请教各位，一般能提出多少有效细胞？

18943340581

冻存密度是2*107；样品：冻存液=4:1

ag2017

样品：冻存液=4:1   DMSO终浓度不高于10%

枫之叶影

我们做的DMSO的最终浓度为5%

luyue6453

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& i5 p  G7 M$ G1 ?8 A0 e# t不太明白这个样品是什么？冻存液配方是什么？只有血清和DMSO,还是加培养液?

luyue6453

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luyue6453

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淋巴细胞分离液分四层后，取白膜层，然后要不要洗一洗，最后收集单个核的时候不是离心去上清吗？那您指的样品是什么？4:1？完全不明白，能说的详细点吗？谢谢

18943340581

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1 W: f- J+ m7 K; q  J) D3 {1 U) V2 c/ |
一般脐血的冻存密度是2*107，离心去上清后用血清重悬，将细胞密度调整到2*107左右，之后样品：冻存液=4:1

iytbxxg

一般来说，细胞的冻存密度不超过 2*107个每ML 为好，而DMSO的终浓度为了5%到20%之间，一般都选择10%的DMSO终浓度，很少有人超过15%。脐带血中单个核细胞应该可以参照这个吧。

大少爷

1. 你冻存的是单纯的ficoll分离完成的单个核细胞，还是用HES分离完成的脐血浓缩混合液（包含白细胞，部分红细胞，血浆）？4 y; v; Q0 k7 a6 i
2. 如果是ficoll分离完成的单个核细胞，脐血的冻存的终密度是2*107左右。细胞用血浆重悬（浓度4*107左右），- J3 Y* b; Y8 p# l  c( f( I
  加入等量冻存液（血浆：dmso=9:1），分装到冻存管（1.8ml或4.5ml）；  Y7 T) ^3 ^; b2 V) {3 b
3. 如果是HES分离完成的脐血浓缩混合液，用OriGen冻存袋冻存，一般是32ml（浓缩混合液）+8mi（冻存液，冻存液配方：50% dmso +50% Dextran40），其实就是4:1，然后程序降温。