构建质粒酶切

ningtinglu

回复 yaolinzhang 的帖子' f& ]" G. z( V; B1 V: D$ @+ S6 Q
4 u5 v8 c; r5 E9 {3 B
两种酶都是NEB的，在NEB官网上找的buffer，连了T载后相同体系可以切开。1和2应该都不是原因，保护碱基是在网上找的不知道会不会影响

yaolinzhang

回复 ningtinglu 的帖子$ m7 _: ]. P+ }4 d+ F
8 C, O, @( q6 X
我能想到的原因有：/ {- L8 w( M3 \) o
1.两种酶的buffer使用不合理；
+ c1 Y5 W1 N) v5 z  D2 u& n$ C0 X  h2 n2.酶失效；8 z' g1 ?1 P6 I, H! [4 r7 q
3.酶切位点有影响% _9 [& V, p. k% m; K
        不过3的可能性不大，建议楼主检查一下buffer，也可使用不同公司的酶试试；另外，先可分别单切，看看结果，再双切。