脐血分离的EPC的CD309表达量应该是多少？

coffee.cat105

          如题，现在在做脐血分离EPC，细胞形态看上去不错，铺路石样，增殖速度不错，3天长2倍没有问题，P1的血管形成情况也很不错，可是CD309的表达量一直就在10%以下，请问一下各位前辈这个脐血中分离的EPC的CD309流式表达应该是多少？会随着传代逐渐降低吗？我做了P1的，P3的，P4的，一直很低，但是看文献都在70%以上…………& |$ P  G( ?( I0 v% H& p& z
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        有没有EPC做流式的protocol，急需学习啊。
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pailishi

你用的是哪个的CD309?什么荧光的？是否在保质期内？我们做的脐血EPC养到P2一般确实在70%左右，甚至到90%
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) _! f% V2 [7 N3 _1 x4 @, @有可能是抗体本身的问题，你可以换一个其它公司的抗体试试

pailishi

你用的是哪个的CD309?什么荧光的？是否在保质期内？我们做的脐血EPC养到P2一般确实在70%左右，甚至到90%
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  O3 f' F- R% f3 p有可能是抗体本身的问题，你可以换一个其它公司的抗体试试

coffee.cat105

pailishi 发表于 2013-11-12 09:05 ) R! C/ [5 C% |% z0 x4 t: @- T
你用的是哪个的CD309?什么荧光的？是否在保质期内？我们做的脐血EPC养到P2一般确实在70%左右，甚至到90%$ k4 `7 S6 }' x/ Z

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抗体是BD的，接的PE，才买的，还不到半年…………没有确实的证据说是抗体的问题领导不会让换抗体的啊，( J* f( `& d; r, L* H) N
你们做的脐血也这么高吗？用的什么培养基，我用的EGM-2+10%FBS，消化是用Gbico的温和型的胰酶。

pailishi

BD公司，PE荧光，货号560872，培养基只用的EGM-2，脐血EPC

coffee.cat105

pailishi 发表于 2013-11-14 15:41 ! \6 K# P9 M9 i5 ]6 [6 U
BD公司，PE荧光，货号560872，培养基只用的EGM-2，脐血EPC

4 y9 n5 K4 x5 X+ p) g% ~- Z& C: B抗体是一样的，你培养基只用EGM-2的意思，是LONZA的EGM-2，含2%的血清的那个吗？

pailishi

是的

coffee.cat105

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6 T. K9 N! g) w/ I$ C% ^+ h1 T- [" D8 K
又折磨了两个月，中间有一次上到60%，后面又做不出来了，问了好多人，都说一直很高，不能理解我这个是什么问题，怎么办啊