成骨诱导用的维生素C

huangcong1988

想问问，大家做成骨诱导用的是哪种维生素C，我查了一下sigma的维生素C，货号太多了，而且价格都不统一，想问问大家用的哪种货号的VC效果比较好，谢谢！

sysuhoo

其实你完全不用有这个担心的必要，就我们实验室的经验无论是国产的还是进口Vc对成骨都一样，因为Vc的主要作用是抗氧化，防止成骨过程中细胞过密，导致脱膜或者细胞死亡。货号不一样主要是分子中含水或盐不太一样，关系不大，你只要保证用分子量换算后Vc的浓度一致就行了。

huangcong1988

回复 sysuhoo 的帖子
0 B0 c6 T0 y3 W; q8 Z9 T
/ J2 E- z* B2 X7 ^! I. l/ u% |8 O好的，非常感谢！还有就是我用的是磷酸化的Vc呢？有影响吗？

huangcong1988

回复 sysuhoo 的帖子
3 A" q. k# e& p% n) _: C8 ~
7 P' J# P; k9 r3 K, t. z+ |5 D5 X% O另外，我之前做过一次诱导，用的是别人的诱导培养基，你能帮我分析一下又到效果吗？

huangcong1988

回复 sysuhoo 的帖子
9 \1 e% \# M  r4 |" G5 T7 j. r7 K2 U4 M
一个是碱性磷酸酶染色，一个是茜素红染色的，帮忙分析一下，是不是诱导成骨成功了

Xsution

huangcong1988 发表于 2013-11-20 20:02 ! h! B/ t. M9 U  ?# M4 N
回复 sysuhoo 的帖子& |) h8 g* ]% i% V5 P3 o% j2 ~
$ @2 ?& Y# r( P2 @2 A4 i; n; W
一个是碱性磷酸酶染色，一个是茜素红染色的，帮忙分析一下，是不是诱导成骨成功了

/ v2 z$ n' {2 B# }% r6 u4 Q
这个诱导的不是很不错嘛！

huangcong1988

回复 Xsution 的帖子8 x, p/ O5 e1 J! \2 ?8 o. b

  y1 C& m- }4 j8 D/ e. ?" k怎么分析呢？就是这个红色的点都是钙结节吗？还有，就是怎么定量分析一下形成的钙呢？

Xsution

回复 huangcong1988 的帖子; p( J3 M+ u+ U1 Z
7 `! F/ ^: e3 Y! B! \' t
我也是新手。不过貌似至少两种半定量分析方法：. T5 Q6 w7 J1 w
1. 溶解ARS 然后测吸光度 参见：millipore的 Protocol for quantitative analysis of Alizarin Red Staining：  
! z' p$ |' Y7 f5 B9 ~- P6 `' Hhttp://www.millipore.com/userguides.nsf/a73664f9f981af8c852569b9005b4eee/7478a295308d77978525754d007fbbb0/$FILE/ECM815.pdf
$ ~- Y6 @6 g' _" `
; j) H! @2 l) ?4 }) ^http://www.millipore.com/catalogue/item/ecm815+ t# C( i" ?) @! X$ M0 U0 e2 S, d
2 T( u- c% v- j# B0 d
2. 用Image J 或Fiji进行图片分析 测cover area以及灰度值什么的。
& d7 ]8 C  ^- c8 x- U参考：
8 D3 c: a7 `" vhttps://digarchive.library.vcu.edu/bitstream/handle/10156/3530/THESIS%20FINAL%20REVISION2.pdf?sequence=1
5 o5 z; ~* `4 @- j% `) u7 Q$ x: \Osteogenic Characterization章节/ z, J. o' j0 S8 c* s- m5 U1 F+ i
启示google一下就有一堆文章可参考了。% F; y) x! w7 m. `% {
5 K2 h- L4 o/ w3 Y  G3 h( j
我只是大概了解 还没有具体操作过。% X1 W) x3 b$ G3 u$ X
写的不对的用词不恰当的请高手指正。

huangcong1988

回复 Xsution 的帖子& ^8 f5 V7 \& l( s9 @( G; i

% S4 N: y- a) `  x$ z$ O; _+ M好的，那以后可以相互学习！

sysuhoo

回复 huangcong1988 的帖子* O1 j& ?+ m1 F7 _3 o
8 t- X1 J* K5 k! |# ]3 e
这个诱导肯定是没有问题的，请放心，钙结节的形态就像一群细胞上面长了一个疤，形态不一。
/ m1 Y- F7 E% K, J/ a$ E定量一般采用十六烷基吡啶溶解，10%的浓度，OD465定量。