NSC原代培养及传代相关问题~~~~~求教

ss安雅熙

最近在做新生24h海马神经干细胞的培养遇到如下问题，希望有高手解决！
2 K) _& d0 n# x5 Z" A原代：1、关于取材部位：是取海马还是皮层的干细胞好培养呢？
0 n" |# }/ p" m1 X# x           2、原代消化：我现在用0.125%EDTA-胰酶消化15分钟，效果不错。有人建议光用胰酶消化，请问两者哪个更好些？
- }. |6 t4 d9 Y$ r: f' Y7 z2 Z           3、终止培养：我用10%FBS终止但是还有离心洗一下，对细胞有损伤，有没有更好的办法？有人说用NSC全培终止可以么？原理是什么？/ h# C, |) q$ P, [/ h1 U4 q+ W! C
          4、培养密度：我3*105/ML接种到小培养瓶（底面积25）子里神经球长的不是太多，但是提高密度成球太快而且都聚集一起，请问大多密度接种较为合适？
( Z. _4 B  b4 y# k传代
) B, y7 I# \, I! q% u8 K* B, H         1、我差不多4、5天传代。看帖子说有的就机械吹打，可是我的干细胞怎么吹都吹不散，后来改用0.125%EDTA-胰酶消化15分钟才可以成单细胞，前提是还必须用PBS洗2遍。这样操作传代的损失很多细胞，我有的时候7、8小瓶才能传一个6孔板，忘告诉告诉小妹一声，怎么传代为好，感激不尽啊~~~~~~~8 ~- l! B  a1 _: S! r6 q  v9 ~2 t
    后续还要做神经干细胞诱导分化还要好多问题 望有人一起讨论

yaolinzhang

回复 ss安雅熙 的帖子' ^1 b9 A4 m! u) Z0 |$ K/ X2 R2 P  F0 c
. N% W, M5 U6 C. _0 |# v0 d
问题有点多，尝试一下：- N3 g  `5 A' J; D- g- @$ M' x
1.个人认为海马的比较好，细胞多，再生能力强；) _" t6 a% y7 H, D( z. ^' T! [
2.按你自己的做，出现问题再做trobleshooting；% f! J& g2 _) B
3.终止就行；
3 Y- H" ?! R8 U, O; }4.试试6×105；
, ~/ O' N! w% `$ U+ F' J5.建议用你自己的胰酶消化法，至于PBS冲洗，一般都会损失细胞，不行你可以只洗一遍试试。

ss安雅熙

有没有高手可以回复一下

enderao

你好，我是准备养神经干细胞，不过刚刚开始作动物模型，还没有提取神经干细胞，很多人说用脊髓的神经干细胞比较容易，你感觉呢，以后有什么心得咱们都可以交流下

细胞海洋

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你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样3 d& v2 p( f1 M2 j2 X+ t$ Q0 K
6 z* N9 X5 Y/ d2 p- \* _) ~
否则他会看不到

碧落

用GBICO的accutase消化比较温和

pengxuleo

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4 B+ |( Z0 n, A1 K. ^* ^4 [
关于神经干细胞的传代，不需要消化成单个细胞，只要将神经球分散能小的神经球就可以了，这样细胞长的会好些。像你说的7、8瓶传一个6孔板，说明你细胞还是太少了，也许你传代传早了。