关于细胞刮刮细胞的问题

heiguzi1988

提个疑问，如有专业者请帮助解答：1、用细胞刮去挂组织（肠绒毛）的时候（把组织放在生理盐水里刮），是否会对很多细胞造成机械损伤，即细胞会不会被刮破？【少量刮破没关系，会不会大量损伤】2、刮破的细胞内物质，尤其是RNA、蛋白流入到生理盐水中，能不能通过离心将大部分回收到离心管底？（因为上清液还是要倒掉的，担心损失了这些成分） .) p: T7 t5 ?3 O& Q

, J* E0 x4 O  X. U/ p! Y9 O0 T因为要做转录组测序和蛋白二维电泳。3 t+ W! j; }) |- S  L5 s5 M

( ?- X' f, O- ~感谢！

buildcountry

是贴壁细胞吗？刮的话难免会造成机械损伤。可以用胰酶消化，不好消化的话就加点EDTA，差不多的时候快点加含血清的培养基终止即可。  k. }  ]1 \& [- T$ v- M
如果刮破细胞的话，RNA，蛋白想回收到管底那离心当然是可以的，但就看你的转速和时间了。我们离细胞一般是1500r/min 5MIN 即可，但提RNA 转速13300r/min 10-15min这样子。退一步讲，即使你离下了RNA和蛋白，但是没有加DEPC水 （抑制RNA酶）和PMSF（蛋白酶抑制剂），那都降解了也也没有意义。

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另外我们实验室也不用生理盐水，处理组织的话用组织PBS，养细胞的话用细胞PBS