关于流式分选后的细胞培养问题

涅炎

  我准备将流式分选后的细胞培养三天，并进行转染，实验室老师说流式分选后细胞状态都不好，培养比较困难，死亡率比较高，分选一次代价挺高的，请问各位大侠有人用过流式分选后的细胞做培养么？有什么经验可以讲下，谢谢了。

涅炎

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对不起，没有说清楚，我培养的是乳腺癌MCF-7，经过无血清培养准备再做流式分选，分选后准备继续进行无血清培养。

songzxj

Maybe it's better to transfect MCF-7 before sorting, just a advice, i have no idea about FACS and MCF-7.

yaolinzhang

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FACS分选后培养，细胞状态取决于细胞类型，培养基等情况。比如，以间质细胞为例，分选后培养还是比较容易的；但若分选后培养HSC，就比较麻烦，死亡率倒不是很高，就怕分化，即不能保持原来的状态。

yehaizi

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/ x, }! H) U5 y4 O" _3 G7 _因为流式分选的时候对细胞进行了抗体孵育,比如一些表面分子marker，许多表面分子的作用都非常大，对细胞的信息交流、细胞形态等都有影响，所以在经过流式操作之后，对细胞的伤害较大，我建议分选之后将细胞状态慢慢养好，之后再做转染会比较好

zz091115

不知道细胞系你为啥要分选，不过如果分选后细胞状态不好，有几个建议你可以酌情改进。1.分选样本直接用培养液上样和收集。2.换用更大直径的喷嘴，有可能的话，手动调节降低鞘液压力，不过常见的机型不太好设置，管理员一般也懒得给你搞。3.无血清处理会使细胞状态不好，除非你是做的sphere培养，MCF7需要insulin，别忘了加。4.减少不必要的离心次数和转速。5.抗体染色直接用你的培养基做悬液，或是加点必要的因子。其实说了这么多都是应对原代细胞用的，做了这么久从没见过肿瘤细胞系分选了不活的情况。不过你可以酌情采纳，不过你还得考虑是不是你的细胞分选前状态就已经很差了，分选只是压垮骆驼的最后一根稻草。

April-ming

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6 k4 y# B+ [* r0 }( w0 ^6 e, z+ R1 A前辈好，我是刚解除肿瘤干细胞的，也是做分选，想请教一下，你是先无血清悬浮培养进行粗选，然后流式分选提高纯度吗？

wlxtldt@126.com

我也面临这个问题，分选之后阳性细胞长的不好，而分选后阴性的长势不错，如果是因为操作过程中细胞受损，那两种都应该受影响啊