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标题: 关于感染细胞后外源基因检测的问题 [打印本页]

作者: 我爱火热的冬天 时间: 2013-11-29 00:06 标题: 关于感染细胞后外源基因检测的问题

我的载体上没有荧光标记和药物筛选，现在只有空载体包装的病毒和目的基因的病毒，我该如何进行下一步筛选，感染细胞后，如何检测外源基因的表达？

作者: cyberpig 时间: 2013-11-29 14:32

那載體上總會有fused的tag吧，就好像HA，myc，那些，你可以用它們的抗體做western。如果你有目標protein的抗體，你還可以直接做。你可以轉染後收24，48，72和96小時的細胞來跑western,然後看看哪個時間的表達最高來做後續實驗。如果你只要筛选stably transfected的細胞，那就一定要antibiotic resistance gene了。

作者: 懵懂干细胞 时间: 2013-11-29 15:56

回复我爱火热的冬天的帖子

看来楼主对自己的病毒感染率很有信心啊，我只能说如果你的感染率真的平时每次都能维持在85%以上的话，基本上后续检测就是确定一定外源基因的表达而已，如果没有的话，建议做个FACS检测，可以计算出比例的技术，如果你仅仅是RT或者WB检测的其实你只是检测出外源基因有没有表达，那怕感染效率20%甚至更低也有表达的。

作者: 我爱火热的冬天 时间: 2013-11-29 21:03

回复懵懂干细胞的帖子3 {8 D% J7 `+ x# _, H( F
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有道理，谢谢懵懂版主。

作者: 我爱火热的冬天 时间: 2013-11-29 21:05

回复 cyberpig 的帖子! V9 R# [' M4 U3 z8 h& e Q# L
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谢谢，不过我的载体上没有tag，我是做ips，想检测外源基因的表达而已，做wb是一个好方法，只是还没做过，下次试试

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