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求助:人脐带间充质干细胞培养 问题   [复制链接]

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楼主
发表于 2013-12-16 21:27 |只看该作者 |正序浏览 |打印
本帖最后由 xingyuncao 于 2013-12-16 21:30 编辑 / G+ L7 @5 l) T# o: D1 l

( n( m8 V- ^: L8 r' e4 c. I各位,本人去年使用组织贴壁法培养人脐带间充质干细胞,培养基是DMEM低糖+10%FBS(进口的),基本都是组织贴壁培养7天左右就有细胞爬出,约12~14天传代,一直都很正常,不知怎么了,今年八月份开始,再次使用相同的方法,细胞却怎么都长不好,要么原代很正常,一传代就老化严重,细胞增殖慢;要么原代就老化。到现在已经近4个月了,DMEM低糖和FBS都换着试了,还是不管用,我没辙了。。。焦虑。。。急求各位指导!感激不尽!
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发表于 2013-12-27 14:01 |只看该作者
配好的完全培养基一般只能用1-2个月。  w2 P/ t( D; C
1-2个月后,效价会大打折扣。
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发表于 2013-12-20 10:04 |只看该作者
测一下培养箱的二氧化碳浓度,干细胞对二氧化碳浓度还是挺敏感的!
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发表于 2013-12-18 15:47 |只看该作者
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我们以前也遇到过这样的情况,长达2个月的时间一直培养不出来,排除了污染的可能后,重新换了同一品牌不同批次的培养基和血清,重新配制生长因子,终于将间充质细胞培养出来了!培养基和血清以及生长因子放久了可能效果就没那么好了,一方面是这些试剂不断的开盖关盖,跟空气接触多了,试剂容易产生一些变化,另一方面是冰箱不断地开门关门,有时候开门时间长,温度变化对试剂的保存也会产生一些影响。同意楼上的说法,脐带质量好的话间充质细胞生长状态比较好,获取的数量多,一般选择粗的脐带。
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发表于 2013-12-18 15:34 |只看该作者
我也听说过类似的情况,但是至今未能解决

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发表于 2013-12-17 16:38 |只看该作者
回复 xingyuncao 的帖子) ~5 h9 }0 F8 {6 G4 ]! A3 t9 K3 Y
9 c: ^* f+ e) v5 q7 g  H+ j
脐带培养时不同脐带差别很大,有的脐带很容易长细胞,有的就很难长,你选择脐带时最好选脐带好,稍微粗一点的,一般细细的就很难长,我是这么认为的。
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发表于 2013-12-17 15:52 |只看该作者
可能是生长因子的问题,生长因子,配好的培养基,一般一个星期左右就要重新加因子了,因子的有效性也就一个星期左右!
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发表于 2013-12-17 13:21 |只看该作者
不知道你们培养细胞时培养液里面加生长因子没有!细胞老化快,增殖慢,应该和生长因子有关!
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发表于 2013-12-17 11:14 |只看该作者
本帖最后由 xingyuncao 于 2013-12-17 11:21 编辑
6 K4 u4 e7 i6 Z. j2 D
% F) e9 t& Q5 j4 B4 H/ D. n回复 wind789 的帖子8 e" g) A9 c/ {0 x3 X$ i8 H* F

8 l4 M- ~* E4 V. T+ J2 `8 d; h肯定没有污染的,我都做过检测细菌、真菌、支原体、衣原体,都是阴性。培养箱应该也没问题,因为用成品培养基细胞就长得好好的,自己配的就不行,跟去年一样的东西,今年怎么就不行了,找不到原因。。。实在是郁闷
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报纸
发表于 2013-12-17 11:12 |只看该作者
回复 limeiying 的帖子0 Y" R/ B- f: M7 Z
! ~$ e8 ^) D- U9 u
是同样的试剂重复不出来,抓狂
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