求助：人脐带间充质干细胞培养 问题

xingyuncao

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各位，本人去年使用组织贴壁法培养人脐带间充质干细胞，培养基是DMEM低糖+10%FBS（进口的），基本都是组织贴壁培养7天左右就有细胞爬出，约12~14天传代，一直都很正常，不知怎么了，今年八月份开始，再次使用相同的方法，细胞却怎么都长不好，要么原代很正常，一传代就老化严重，细胞增殖慢；要么原代就老化。到现在已经近4个月了，DMEM低糖和FBS都换着试了，还是不管用，我没辙了。。。焦虑。。。急求各位指导！感激不尽！

feifa1314

配好的完全培养基一般只能用1-2个月。
! c. m  v. t4 I1-2个月后，效价会大打折扣。

荷荷

测一下培养箱的二氧化碳浓度，干细胞对二氧化碳浓度还是挺敏感的！

sewing

我们以前也遇到过这样的情况，长达2个月的时间一直培养不出来，排除了污染的可能后，重新换了同一品牌不同批次的培养基和血清，重新配制生长因子，终于将间充质细胞培养出来了！培养基和血清以及生长因子放久了可能效果就没那么好了，一方面是这些试剂不断的开盖关盖，跟空气接触多了，试剂容易产生一些变化，另一方面是冰箱不断地开门关门，有时候开门时间长，温度变化对试剂的保存也会产生一些影响。同意楼上的说法，脐带质量好的话间充质细胞生长状态比较好，获取的数量多，一般选择粗的脐带。

569981454

我也听说过类似的情况，但是至今未能解决

luyue6453

回复 xingyuncao 的帖子
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" D' U/ ^* G5 Y" X4 p1 W脐带培养时不同脐带差别很大，有的脐带很容易长细胞，有的就很难长，你选择脐带时最好选脐带好，稍微粗一点的，一般细细的就很难长，我是这么认为的。

lazhla

可能是生长因子的问题，生长因子，配好的培养基，一般一个星期左右就要重新加因子了，因子的有效性也就一个星期左右！

xuyang0317

不知道你们培养细胞时培养液里面加生长因子没有！细胞老化快，增殖慢，应该和生长因子有关！

xingyuncao

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6 {8 u- ]+ N+ W: }: ~* A回复 wind789 的帖子
1 A) D6 I$ [/ W9 |  y% ?% T* O$ o5 h) a
肯定没有污染的，我都做过检测细菌、真菌、支原体、衣原体，都是阴性。培养箱应该也没问题，因为用成品培养基细胞就长得好好的，自己配的就不行，跟去年一样的东西，今年怎么就不行了，找不到原因。。。实在是郁闷

xingyuncao

回复 limeiying 的帖子0 Z' C: q" y# J# m- Z
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是同样的试剂重复不出来，抓狂