求助：人脐带间充质干细胞培养 问题

xingyuncao

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& x* g& s9 ?6 G, x4 ?' ?1 s* [各位，本人去年使用组织贴壁法培养人脐带间充质干细胞，培养基是DMEM低糖+10%FBS（进口的），基本都是组织贴壁培养7天左右就有细胞爬出，约12~14天传代，一直都很正常，不知怎么了，今年八月份开始，再次使用相同的方法，细胞却怎么都长不好，要么原代很正常，一传代就老化严重，细胞增殖慢；要么原代就老化。到现在已经近4个月了，DMEM低糖和FBS都换着试了，还是不管用，我没辙了。。。焦虑。。。急求各位指导！感激不尽！

limeiying

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用同样的试剂也重复不出来还是有更换试剂品牌之类的？

wind789

如果是我的话，我想先排除这二方面原因：1、污染；2、培养箱状态校正。然后再看。

frankhu

建议试剂都重配，脐带在酒精中不要浸泡太久。我们实验室都是用D/F12+10%的FBS，百试不爽。

xingyuncao

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是同样的试剂重复不出来，抓狂

xingyuncao

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( l# ]5 S6 N" O, _, z8 q7 y5 R肯定没有污染的，我都做过检测细菌、真菌、支原体、衣原体，都是阴性。培养箱应该也没问题，因为用成品培养基细胞就长得好好的，自己配的就不行，跟去年一样的东西，今年怎么就不行了，找不到原因。。。实在是郁闷

xuyang0317

不知道你们培养细胞时培养液里面加生长因子没有！细胞老化快，增殖慢，应该和生长因子有关！

lazhla

可能是生长因子的问题，生长因子，配好的培养基，一般一个星期左右就要重新加因子了，因子的有效性也就一个星期左右！

luyue6453

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4 v( Q2 I3 y+ @2 x  ?) e4 Z2 e脐带培养时不同脐带差别很大，有的脐带很容易长细胞，有的就很难长，你选择脐带时最好选脐带好，稍微粗一点的，一般细细的就很难长，我是这么认为的。

569981454

我也听说过类似的情况，但是至今未能解决