求教 酶消法做脐带间充质干细胞

pcljsw2008

我之前一直都用组织块法，现在想换种方法，改酶消法。我用一倍浓度的胶原酶，体积一比一酶消剪碎的脐带组织块，离心得细胞接种，要换四次液，大概十二天，才能看到细胞增殖，接种第一天就有细胞贴壁，但会逐渐皱缩死亡，剩下一点点才能分裂，求高人指导下有没有什么更好的方法，或者我这个实验过程中有什么需要注意和改进的地方，在此谢过！！

pcljsw2008

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能告诉我下透明质酸酶，胰酶，和脐带组织的比例吗，就是两个酶的浓度，然后三者的体积比，谢谢啦，做了四批了，效果不怎么理想

pcljsw2008

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能告诉我下胶原酶，胰酶的浓度和比例吗，以及和组织块的体积比，生长因子我加了的，我现在差不多十厘米做下来就只能接一个t25瓶子，选择性培养基培养十天左右才开始分裂增殖，而且有不少还会凋亡。谢谢啦

pcljsw2008

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  v4 _, a: r' k) f/ `对的，我现在就是这样，弄盐水稀释，再过滤的，2000转离心，但细胞还是很少，我想问下我大概十毫升碎组织，消化结束后的透明质酸需要多少透明质酸酶，浓度和体积，谢谢