贴壁培养NSC后，加化合物进行分化后，细胞聚团怎么办？

碧落

贴壁培养NSC,第二天加化合物，同时撤去生长因子，进行分化。后进行免疫组化，发现细胞总是会移动聚团，形成网络状的结构。接种时，细胞是均匀的。
; Y7 T% ?% ^4 S: A请问大家有出现这种现象么？怎样予以解决呢？因为细胞聚团，导致细胞重叠而非单层，会影响后期的图像分析~~~

afei198520

我也碰到过类似的问题，请问你用的包被试剂是什么？包被程序？有可能是孔板包被的问题。

碧落

回复 afei198520 的帖子6 r  Q. |6 p% x; J; S8 H4 A: _

: ~/ W7 j7 f) l1 _: u谢谢回复~多聚鸟氨酸+fibronectin。正常培养的时候不聚团，分化的时候才聚团呢？
  W/ R; k1 L+ T. i4 e; z! K" X请问你有什么好的包被方法么，欢迎多多交流
* p! t' o! X% G

afei198520

回复 碧落 的帖子6 Q' u" F" |1 E4 H4 A
! o9 k4 M% l4 ~
现在我只用laminin包被，基本上不会出现什么问题。另外我觉得你可以试试NSC接种后让细胞长两天适应一下再进行分化。

jojo1988509

NSC不是本身就会出现长多了就向上长然后就像团状的情况么？

碧落

回复 afei198520 的帖子2 i) p9 n8 O: M0 ]/ C; |& T

% c  ~- {/ n2 v8 e) P/ j嗯，适应两天再给药会稍微好点，也是时好时坏的。请问lamin包被的具体条件是什么？多少浓度，包被多长时间？什么溶液？谢谢……我想试试

angelyannan

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6 S" J( ^1 k; m; k/ p( }, f6 h# Z; F$ m& z* N
本人买的是sigma的，用无菌的PBS配制，然后你按照说明书的浓度和包被时间，包被条件操作就好了