讨论：MSCs 移植标准化方案的建立?

wf78365421

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' s; `8 S; Z3 \* p9 uMSCs 移植标准化方案的建立?
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) G3 B4 B; n: j# t" D% C关于 MSCs 移植标准化方案的建立却并不十分容易。作为一种活的、动态的细胞，MSCs 在临床治疗中的应用与传统治疗药物并不相同，并非选择合适的适应症与合理的治疗方案就可取得良好的一致的临床效果。细胞制备的多个环节都可能影响 MSCs 细胞活性，进而影响临床治疗效果，因此标准化方案的建立需要从多个方面进行探索与完善：$ o! X6 d; i3 t9 X' w- r0 v/ U
一、细胞来源：据报道，MSCs 可从多种胎儿与成体组织中分离，包括脂肪、牙髓、胰腺、骨骼肌、真皮层等。不同来源的 MSCs 生物学特性并不一定都相同。之前应用于临床的 MSCs 主要来源于骨髓，但 MSCs 在骨髓中含量极低，采集过程有创，病毒感染率高及数量与分化潜能受供者年龄限制等因素使其并不适宜于临床上的广泛应用，此外，有些疾病患者本身骨髓 MSCs（bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs）就存在缺陷，并不适宜于自体移植。越来越多的研究认为， UC-MSCs 有望成为 BM-MSCs 的理想替代来源。UC-MSCs 来源于作为医疗垃圾的脐带，取材容易，来源广泛，标本采集无创且不涉及伦理。UC-MSCs 在脐带中含量丰富，理论上每克脐带可分离获得 10^7细胞，这为 UC-MSCs 规模化生产提供了可能。然而目前的制备工艺所获得的细胞数量与理论值相差甚远。这从一定程度上造成了 UC-MSCs 的损失以及生物资源的浪费，并不利于其临床应用.( c2 N+ U( [' U  l( u2 W9 R
二、细胞培养前处理：无论是骨髓、脐带或其他组织来源的 MSCs，从标本采集到分离获得 MSCs，必然要经过一定的处理，而处理方式的不同同样会影响 MSCs 生物学性。Seeger 等研究认为，采用不同的分离方法对采集的骨髓进行处理，所获得的 BMMSCs 数量、增殖能力、迁移能力均不同；Assums 等提出，分离过程存在血小板与血细胞的污植时的保存条件对 MSCs 细胞质量的影响并无相关研究。而对于 UC-MSCs 的分离，不同分离方法与不同处理时间均会对所获细胞数量与状态产生影响。  
  F& _  j& R, v7 e8 l) a$ }, |# _三、细胞培养环境：MSCs 体外培养环境包括适宜的基础培养基与合适来源及浓度的血清。目前用于 MSCs 培养的基础培养基包括 α-MEM、低糖-DMEM、高糖-DMEM、IMDM以及 PRMI 1640 等，不同种类的培养基会影响 MSCs 功能。而血清来源的不同同样会对MSCs 产生影响。Nimura 等在对比胎牛血清与自体人血清对 BM-MSCs 与滑液来源 MSCs影响的研究中发现自体人血清较胎牛血清相比，可促进滑液来源 MSCs 的增殖，但在BM-MSCs 培养上却得到了相反的结果。另外，血清浓度同样对 MSCs 状态也有很大影响。1 f/ `" ~8 G6 K. L  k( D) b9 n
四、细胞代数：在 MSCs 移植过程中，细胞代数的选择同样可能会影响治疗效果。Vacanti等提出随着扩增代数的增加，猪 MSCs 细胞形态发生了改变、增殖能力明显减慢且丧失了成骨、成软骨分化能力，仅能向成脂方向分化；Choi 等证实 MSCs 的旁分泌作用同样会随着代数的增加而减弱。因此，选择早期代数的细胞进行移植可能会保证治疗效果，但需注意的是早期代数 MSCs 细胞纯度问题。
0 T) E; Y$ y5 ^5 w; Y1 k9 g五、细胞输注数量：细胞移植数量在 MSCs 治疗中并无统一的标准。不同研究组间对不同疾病甚至同一疾病进行治疗时所采用的细胞数量并不相同。等将 105、106与 107三个数量级的自体 MSCs 移植入犬退行性椎间盘间隙进行治疗时发现，10^6为最适的细胞移植数量，细胞移植数量过少（10^5）导致存活细胞数量减少而过（10^7）则导致移植细胞发生大量凋亡。
+ i& L' M6 k% M2 y4 U# q: O六、细胞移植途径：MSCs 治疗时的移植途径根据疾病种类不尽相同。虽然静脉给入的移植方式最普遍，但糖尿病足时的局部外用与某些疾病的定位植入方式同样并存。对同一模型采用不同的植入方式所产生的治疗效果同样存在差异。
, r# H: }) u6 E9 W& O( K& z七、细胞移植时机：MSCs 移植时机对治疗效果影响最明显的为各种纤维化疾病。以肺纤维化为例，在博来霉素诱导的肺纤维化模型早期给予 MSCs 移植可明显减轻肺部炎症及纤维化程度，而在已形成纤维化的患者中治疗效果却并不十分显著。
( `, y% I. I6 y% [八、细胞移植保存条件：MSCs 在进行临床移植前需脱离正常的培养环境，保存于 FDA批准的可被直接输注于人体的移植保存介质中，运送到等待移植的患者床旁。虽然新分离的 MSCs 即刻进行移植可获得最大的移植效果，但事实上，MSCs 在临床应用时并不能实现即刻输注。众所周知，MSCs 的分离培养必须在符合 GMP（Good Manufacture Practice，GMP）标准的实验室中进行，而移植过程则必须在具有资质的医院中完成。目前，并非所有可进行 MSCs 移植的医院均建有符合条件的 MSCs 生产车间，从实验室向临床的运输过程必然延长了 MSCs 移植前等待时间，而今后进一步开展 MSCs 大样本多中心研究时，同一来源、同一批次的 MSCs 必然要被运往各地进行移植，所需的运输时间会更长；此外MSCs 在外科应用时（如心肌梗塞治疗中的冠脉输注、帕金森氏病治疗中的开颅定位给入），手术时间的不确定性也会增加 MSCs 移植前的保存时间.* a/ D; f# D" i% \3 l( N# x! ?* k" l

# Z: J* L# t/ S2 @8 _综上所述，建立 MSCs 细胞治疗的标准化方案与指南仍有很多问题需要解决。
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zhen022

求相关说法的参考文献

wangshumin12311

现在临床实验不是暂停申报了吗？

wen373

想看参考文献

michael1013

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7 i! R1 R& \2 e, {3 S8 L楼主有相关参考文献吗？