hiPSCs分化心肌细胞的消化

spongezhao

本人正在做hiPSCs的心肌分化，出现beating clusters后要如何把它们消化下来做膜片钳或者流式呢？
, a5 J$ M8 I, C' v- y7 ?是像挑克隆那样把它们挑出来消化，还是整个孔全部消化呢？& n# J, P/ E+ n# l7 Q
分化效率不高~- N) h+ f$ p9 W9 v
求指教~

ciweiyuan

分化效率不高，你就把它挑出来消化

spongezhao

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" b# B6 y/ Y) w# b1 y' N
  c0 M8 s5 v4 Q2 v谢谢~请问用什么消化液消化比较好呢？0.25%的胰酶/EDTA可以吗？" u% D. E- {& g! L
怎样的消化方法比较合适贴壁做膜片钳呢？非常感谢~

智露

请问你做过小鼠的胚胎干细胞向心肌细胞方向分化吗？

spongezhao

回复 智露 的帖子9 d% `: V# b* J. }  u& q* Y+ J, z
) h4 w0 ~( f7 v3 |, @8 t* y
没有专门做过呢~
+ S) M$ p- m' U* S) V不过在其他分化过程中经常会遇到跳动的心肌细胞，中胚层随机分化成心肌细胞的概率挺高的应该。+ x9 S1 h* O+ }& l: ]  G
用悬滴法悬EB，然后贴壁培养，其中添加适当的细胞因子，分化效率应该会不错的~

智露

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' E& h0 ^0 _" g; {9 O4 F( p
1 L, b7 z8 y( X+ Z你经常遇到啊？请问你用多少的什么血清啊？我也是悬滴法形成EB，可是悬浮下来看的EB一点不圆，你知道我主要原因是什么吗？好像细胞边缘分化的比较多而且容易散。求教，谢谢！

spongezhao

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9 p% K& `' [0 b" I$ O, @+ Q, u# f5 d) J, [; C: [" V
随机分化过程中是会碰到的。
8 C7 g) P$ V  y* S就是平时用来养mES的培养基不加lif，15%gibco的FBS
0 R! T( w5 z/ a. |) u+ P8 d6 rEB的状态和本身mES的状态和起始细胞量有关吧。

spongezhao

回复 智露 的帖子" a, P' Q1 [0 E; R
- I7 S) |6 p3 N$ I2 s
随机分化过程中是会碰到的。
0 {- }2 G" Q( q, F就是平时用来养mES的培养基不加lif，15%gibco的FBS1 v3 u( y( x0 l2 l+ e- b  P
EB的状态和本身mES的状态和起始细胞量有关吧。