hiPSCs分化心肌细胞的消化

spongezhao

本人正在做hiPSCs的心肌分化，出现beating clusters后要如何把它们消化下来做膜片钳或者流式呢？
% O' |. `2 y8 |2 x7 Q7 G是像挑克隆那样把它们挑出来消化，还是整个孔全部消化呢？
( {' J: {. S1 \分化效率不高~
- [( z) y+ W1 [求指教~

ciweiyuan

分化效率不高，你就把它挑出来消化

spongezhao

回复 ciweiyuan 的帖子
. V- d0 D8 V* b! B# O, [! \$ D+ K- g3 U/ ]" U* i
谢谢~请问用什么消化液消化比较好呢？0.25%的胰酶/EDTA可以吗？8 |: C/ }7 @- s
怎样的消化方法比较合适贴壁做膜片钳呢？非常感谢~

智露

请问你做过小鼠的胚胎干细胞向心肌细胞方向分化吗？

spongezhao

回复 智露 的帖子
' p8 \# E+ B0 i: v1 _# z2 v- d2 [/ H) _2 @
没有专门做过呢~
+ O  N+ l% S0 _/ @4 C+ b3 A不过在其他分化过程中经常会遇到跳动的心肌细胞，中胚层随机分化成心肌细胞的概率挺高的应该。
; M: v8 V; C8 _. i* W: V$ [6 P* m  o用悬滴法悬EB，然后贴壁培养，其中添加适当的细胞因子，分化效率应该会不错的~

智露

回复 spongezhao 的帖子: r: S( {$ i  l) y/ j; L7 u5 D

3 ^( o7 }* S/ e你经常遇到啊？请问你用多少的什么血清啊？我也是悬滴法形成EB，可是悬浮下来看的EB一点不圆，你知道我主要原因是什么吗？好像细胞边缘分化的比较多而且容易散。求教，谢谢！

spongezhao

回复 智露 的帖子1 g% k2 d, |: s  r
# t% t9 R+ j$ B/ B
随机分化过程中是会碰到的。
, A4 ~1 |( G+ }: n就是平时用来养mES的培养基不加lif，15%gibco的FBS2 P! B! u2 v& t7 _
EB的状态和本身mES的状态和起始细胞量有关吧。

spongezhao

回复 智露 的帖子/ v% i4 s  D3 y8 I' I+ a  k- T

3 B6 K; W& n0 D& N! v7 M3 {随机分化过程中是会碰到的。
' s. O/ u- w* \2 \; ~2 }4 f: {就是平时用来养mES的培养基不加lif，15%gibco的FBS
) O4 ~9 b0 L4 g. P$ H5 HEB的状态和本身mES的状态和起始细胞量有关吧。