hiPSCs分化心肌细胞的消化

spongezhao

本人正在做hiPSCs的心肌分化，出现beating clusters后要如何把它们消化下来做膜片钳或者流式呢？
9 b) v7 y$ }6 X; w/ j: R是像挑克隆那样把它们挑出来消化，还是整个孔全部消化呢？' R6 s* _8 K9 A1 @, Z9 m7 n: h
分化效率不高~4 ~( n' h5 B+ [! f7 C! Q) |
求指教~

ciweiyuan

分化效率不高，你就把它挑出来消化

spongezhao

回复 ciweiyuan 的帖子0 y0 t' \9 i4 R+ t0 {* |* w& o

" M& j7 N" [; ~# L0 o谢谢~请问用什么消化液消化比较好呢？0.25%的胰酶/EDTA可以吗？
6 t9 `: X/ A, p& N: w" ~/ q怎样的消化方法比较合适贴壁做膜片钳呢？非常感谢~

智露

请问你做过小鼠的胚胎干细胞向心肌细胞方向分化吗？

spongezhao

回复 智露 的帖子1 S% q  r3 @; i

6 A' W! x) u  p, W+ `3 u( p2 B没有专门做过呢~3 \1 E8 ~) ^/ ?" w7 }3 ?
不过在其他分化过程中经常会遇到跳动的心肌细胞，中胚层随机分化成心肌细胞的概率挺高的应该。
7 M) O/ l% j; f% B) ]2 E; W用悬滴法悬EB，然后贴壁培养，其中添加适当的细胞因子，分化效率应该会不错的~

智露

回复 spongezhao 的帖子
- M. \: w, B* V- L" a$ W! q# Q) h' ~7 m0 O# z" x7 r9 o
你经常遇到啊？请问你用多少的什么血清啊？我也是悬滴法形成EB，可是悬浮下来看的EB一点不圆，你知道我主要原因是什么吗？好像细胞边缘分化的比较多而且容易散。求教，谢谢！

spongezhao

回复 智露 的帖子' j3 {: g  {+ ~. q& g
' `4 _, c, B/ G7 i- K! x0 x. D- x
随机分化过程中是会碰到的。
% H4 Q, }3 h1 [就是平时用来养mES的培养基不加lif，15%gibco的FBS4 W/ k; P; v( u: s+ @( ^
EB的状态和本身mES的状态和起始细胞量有关吧。

spongezhao

回复 智露 的帖子. a; S5 t- a1 `: X. f

& Y. [4 Y8 n0 R; a9 m& p随机分化过程中是会碰到的。: h& {" l+ S+ B2 P+ S( p- ]" h" z- d. [
就是平时用来养mES的培养基不加lif，15%gibco的FBS
/ W: a) B9 B  Z) P% Y9 eEB的状态和本身mES的状态和起始细胞量有关吧。