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标题: CIK细胞培养，接种量少，能长起来吗 [打印本页]

作者: momoenn 时间: 2014-3-28 19:41 标题: CIK细胞培养，接种量少，能长起来吗

今天分了一份血，只有3.4X10^7个单个核细胞，接种密度为2X10^6个/ml。还能长起来吗？
以前实验室培养这样的量少的细胞，都是前期细胞状态挺好，但后期增殖不行。但愿这次能长起来。5 Y: e, {2 N+ J! @; Y \
大家给指导一下看看需要注意哪些问题？比如说补液的比例什么的

作者: 漂泊的风 时间: 2014-3-29 08:18

应该可以的，只不过要达到需要的数目需要的时间比较长

作者: zhrt 时间: 2014-3-29 09:50

应该没有问题！你采的什么血样

作者: momoenn 时间: 2014-3-29 14:35

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脐血，之前培养的两份接种量少的反正增殖不好。这次培养的这份挺重要的，希望一切顺利

作者: zhrt 时间: 2014-3-29 15:21

用的什么培养液及因子

作者: momoenn 时间: 2014-3-29 16:50

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X-VIVO15,因子是IFN-a。

作者: momoenn 时间: 2014-3-29 16:53

回复 zhrt 的帖子' C9 g7 X5 h# c2 p/ Z: @
# C. X' k7 l' h5 e* [% l
今天是接种后的第一天，添加CD3和IL-2后，混匀，出现了絮状物。这是啥情况啊？

作者: ccst4838318 时间: 2014-3-30 00:48

大概是蛋白稀出物，来源可能出至用的血清，或者裂解的细胞，对细胞培养应该没多大影响

作者: xxue311 时间: 2014-3-30 09:09

因子用IFNγ要好些。

作者: zhrt 时间: 2014-3-31 11:29

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γ-干扰素好点

作者: zhrt 时间: 2014-3-31 11:34

回复 momoenn 的帖子! U+ ?2 B4 J. t) t
3 |7 Z( `+ c7 F }, r. w" Z
絮状物肉眼能看到吗？我们培养的是外周血的，细胞裂解，细胞的碎片，血红蛋白可能会导致絮状物，只有在显微镜下可以看到，如果不是大量的话养养可能情况会好转

作者: luyue6453 时间: 2014-3-31 15:20

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# m" H8 |0 n% _! B1 Z5 n8 A' s
要看絮状物是不是细胞团，如果是细胞团就丢弃吧，后期细胞站不起来的，而且絮状物越来越多，吹都吹不散的都是死细胞了，跟你操作没有关系，就是个人体质的事，如果絮状物不是细胞，那样没关系的，是蛋白析出，你把它吸出来就可以了，然后重新补因子，最好不用自体的血浆培养，会经常出这样的情况。

作者: momoenn 时间: 2014-4-1 09:39

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脐血也会出现这样的问题吗？昨天是培养的第三天，大的絮状物消失了，但是肉眼依然可看到细胞团。台盼蓝计活率只有90%。培养基颜色变黄

作者: momoenn 时间: 2014-4-1 09:39

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能看到

作者: momoenn 时间: 2014-4-1 09:41

回复 luyue6453 的帖子+ E6 Y- o% s0 l

会不会是我直接在培养瓶里添加的因子造成局部因子浓度过高，引起的细胞聚团或死亡

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 10:26

回复 momoenn 的帖子5 B% Y1 r, j: T6 H7 W; c

细胞因子只要混匀应该没问题，用的什么抗凝剂？

作者: momoenn 时间: 2014-4-1 14:12

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2 B2 O* o+ B& G' x6 M3 M {, F
枸橼酸钠。商品抗凝剂，血液保存液III

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 15:21

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9 u2 z; z4 b! m
枸橼酸钠能有培养液中钙离子结合，影响细胞生长的。我们都用肝素钠的

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 15:26

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论坛提问回答集锦

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 15:30

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2 R* a+ h/ T, H ?7 [7 P- ?
论坛提问回答集锦
http://www.stemcell8.cn/thread-70491-1-1.html w: q$ P4 p q7 P5 O" H: |5 I6 i: }
，抱歉我也是刚看到有着链接，所以给你多发了几遍

作者: momoenn 时间: 2014-4-1 16:31

回复 zhrt 的帖子/ _$ j& x* T$ K* j t& X. l6 d/ P

额。今天和实验室前辈交流时发现，可能是因为培养前几天，有些细胞还是贴壁的，然后我用吸管吹打混匀了，可能对细胞造成了伤害，所以才会补液后看到很多絮状物。
细胞已经这样被我折腾了三次了，你一定要挺住啊。

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 16:49

回复 momoenn 的帖子. L4 p6 h# o! S
' u+ l% @) r \* F* z3 n
找到原因就行

作者: momoenn 时间: 2014-4-2 08:42

回复 luyue6453 的帖子& ?- e% [3 N1 A. A' H

我这个絮状物可能是由于我用吸管吹打造成的（前期细胞贴附性强一些），也长不起来了吗？

作者: aochongyu 时间: 2014-4-2 09:40

回复 momoenn 的帖子) z8 f( `1 l; T: f* @6 Q

个人感觉一般吹打不会使细胞产生絮状物，估计就是蛋白析出或者密度过大产生聚团现象吧

作者: 草胞 时间: 2014-4-2 09:47

正在生长的细胞，一般轻轻吹打，不会对细胞产生很大的损害啊。絮状物也有可能是细胞都长到了一起啊

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-5 16:46

回复漂泊的风的帖子5 l& x: ~8 Z0 s# R' u% R. L
. z' d0 t% `5 I9 x0 h, y
请问CIK多久可以把癌细胞杀灭干净

作者: yangpan521 时间: 2014-4-7 21:55

回复 luyue6453 的帖子
5 Z9 }) F6 g; Z# V( t. s
想问一下如果是抽病人的血液来培养，出现这种情况就扔掉，那对病人怎么交代？

作者: yangpan521 时间: 2014-4-7 21:57

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血浆有没有灭活呀，为灭活的血浆会出现纤维蛋白，粘连细胞，

作者: 漂泊的风 时间: 2014-4-8 08:47

回复星空雾雨的帖子' L: c! \2 Z1 u* n
* t. v; U6 t8 d' N; G8 W5 S3 @
理论上，CIK杀伤肿瘤细胞是通过激活体内的免疫系统实现的，而体内免疫系统的杀伤能力是与体内肿瘤细胞的多少有关的，所以对于细胞CIK多久可以吧癌细胞消灭干净这个问题不太好回答，要看你癌的阶段，是否已经大范围扩散，一般而言对于癌症早期CIK治疗效果还是挺明显的，到中晚期只可能延长寿命，不会彻底治愈。

作者: luyue6453 时间: 2014-4-8 13:12

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用移液管吹了应该没问题吧，但是真是细胞絮状物我觉得细胞都快死了，你养养看吧，

作者: luyue6453 时间: 2014-4-8 13:16

回复 yangpan521 的帖子
- R# z, |3 o3 @
可是细胞一直聚团形成絮状物，本身不增殖，你养着有什么用，然后这样的细胞你就敢给病人回输，如果聚团一吹就散了，那说明细胞活性可以，但是吹都吹不散的细胞那就是要死了，你这样回输对病人更没办法交代。出现这样的情况，不一定是操作者人为造成的，可能是血液本身细胞就有这样的特性，所以应该和病人如实交代，难道这个还用问。

作者: yangpan521 时间: 2014-4-8 16:05

如果絮状不多，可以过滤后再计数和测活性，

作者: momoenn 时间: 2014-4-9 13:13

回复 luyue6453 的帖子, }9 G0 C: G6 P8 G' o" ~
2 ^$ p% I: t: E
活过来了，现在状态啥的都挺好的

作者: momoenn 时间: 2014-4-9 13:53

回复 yangpan521 的帖子
# b3 W9 U' _8 a% }4 g4 ?
没有用血浆

作者: chang-514 时间: 2014-4-9 14:56

絮状物培养一段时间就会散开的

作者: momoenn 时间: 2014-4-16 08:33

回复 chang-514 的帖子$ g' b8 H* A4 h, |: l

是不是细胞团到一定阶段会散开啊，絮状物也会吗

作者: chang-514 时间: 2014-4-17 21:16

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大多数情况会，不过也有些到发放时还没完全散开

作者: shamoye 时间: 2014-4-25 16:37

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+ e7 Y1 U: b1 \0 v+ j" ^* a
这个不一定吧？细胞聚团培养一段时间还是可以的就是长的慢

作者: gd541767393 时间: 2014-4-28 08:47

应该没问题，以前我们接种也是这个数，长的还行，细胞因子也是一样，还加了白介素2，添加点额外的血清会更好

作者: chenguangyu 时间: 2014-7-8 07:52

3.4✘107不少了，可以长起来

作者: chenzhengliang 时间: 2014-7-10 17:06

一般20M（2.0✘107）的细胞量就可以长起来了，一定要保证铺板密度，1M/ml最为适宜；若只有二三十毫升用T75培养瓶养的话，刚开始最好保证培养瓶竖着放置，这样细胞会长得快一些。

作者: zhanglu8677 时间: 2014-7-11 11:19

应该问题不大，以前也养过类似的，前期增值慢，后期就长上来了。还长的挺好的/ M' y# B/ \$ u, I& b6 A9 z, V

作者: zhanglu8677 时间: 2014-7-11 11:19

应该问题不大，以前也养过类似的，前期增值慢，后期就长上来了。还长的挺好的! t2 @7 I: Z, X; m ^+ p+ n8 H7 _

作者: yanglixia 时间: 2014-7-31 08:49

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/ F- v9 K* t, `3 F/ \% m
3*107应该能长起来的，不少了，你要培养几天呢，我知道培养11-15天是没有问题的: L7 W- `8 f( X; K1 F3 D6 M
如果细胞量再少的话就可以加点FBS促进一下，就能长好了

作者: yanglixia 时间: 2014-7-31 08:51

回复 momoenn 的帖子 E9 x$ s5 n: s c/ h

你是用什么包被瓶子的，脐血时很容易出现絮状物，如果团块很大，可以吸出，小就不用管，不影响后期的生长的

作者: 指下人生 时间: 2014-8-8 07:58

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这个密度已经很大了，我们培养接种密度一般是1*10*6左右都长得非常好，后期补液根据细胞数和培养基颜色判断最好，我们实验室一般不换液。

作者: momoenn 时间: 2014-8-8 08:20

回复 yanglixia 的帖子. E/ Q# P( t' n/ B: U( G9 h

请教一下，自体血一般不会出现絮状物吗？

作者: 张源 时间: 2014-9-2 10:09

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2 Q& M* d6 ~- o% e9 }. d6 a& v9 f( I% ?
白介素-2我们都是接种第二天才加的

作者: 张源 时间: 2014-9-2 10:10

γ-干扰素是能接种是加的 CD3包被时加

作者: 骑驴看美女 时间: 2014-9-2 16:53

使用培养瓶养的吗？

作者: 细胞海洋 时间: 2014-9-3 08:05

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; z2 S1 G4 B! g e3 g
你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样

否则他会看不到

作者: 骑驴看美女 时间: 2014-9-3 15:33

受教了，谢谢！

作者: momoenn 时间: 2014-9-9 08:16

回复骑驴看美女的帖子6 D8 D* G3 z1 p) Q ]: T

接种用培养瓶，后期转袋

作者: chenguangyu 时间: 2014-9-16 13:26

回复 momoenn 的帖子# u# R3 n$ O% g

因子用错了，用ifn-伽嘛

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