血小板会影响CIK的生长增殖吗？

gengtongyu521

做CIK培养的过程中，分离完PBMC后，发现有很多血小板残留，加入适当的浓度因子，第2天显微镜观察就会看到有细胞结团，且成团的细胞已经死亡，然后细胞不增殖，成团的死细胞越来越多，到底怎么回事啊？培养基和因子应该没问题，新换的。难道是血小板数量太多，死亡的血小板将细胞聚集在一起？只是我的猜想，请各位帮忙解答。

jxydiandian

1.血小板对细胞增殖生长没有影响的，而且血小板没有细胞核，在体外无法增殖的，很快就会死亡，而且血小板要是死亡裂解的话，还能释放促进细胞生长的活性因子呢，当然了，毕竟残留的血细胞很少，所以这些活性因子也就更少啦，总而言之，对细胞没影响的；
/ }& n: {# q* z: U+ y& r. I/ d2. 另外，就是在最后一步离心的时候，可以稍微降低离心速度，使血小板无法沉降。3 x& p0 J, b4 X
3. 你提到的细胞成团及死亡现象应该是加入的血清里含有纤维蛋白原成分吧，可能是血清没有灭火彻底。
# l, h/ X# F% q! O7 ]8 o以上是个人拙见，仅供参考

chenzhengliang

回复 jianglei_sd 的帖子
5 k( z$ }, z2 _/ {
4 Q6 g2 m: I4 L/ d/ ]: H我指的低速离心是针对于血细胞分离机分离的PBMC，因为这种方式获得的PBMC细胞水平一般都在10*9数量级上，损失一些细胞问题不大。0 b! Q- A) S$ Y* ~# D! V, I. @
采集全血的PBMC洗的话最少也要1000rpm，再低细胞基本都看不到了。

jianglei_sd

chenzhengliang 发表于 2014-7-13 18:11
4 N% ?/ V5 @! H" c很显然不是血小板多的原因，过多细胞凝聚死亡是没加自体血浆的缘故。- E9 v5 W4 @: p& b
自体血浆有维持细胞活性和防止细胞凝 ...

- P3 g" V9 J, ?# F9 |% \
600rpm的速度会不会导致PBMC得率降低？

chenzhengliang

很显然不是血小板多的原因，过多细胞凝聚死亡是没加自体血浆的缘故。
. w0 Q6 A* P* c$ U1 k自体血浆有维持细胞活性和防止细胞凝集的作用，细胞培养时一般都需要加入的，当然使用时别忘了56℃灭火30min，以除去支原体和相关补体等。
9 ^: a% R% R# P! U+ A7 L) _) w血小板对其他细胞生长没有太大影响，它在人体内也不过7~10d的寿命，考虑到CIK要2w左右才能回输，所以血小板还是不要太多。若你发现血常规里PLT超过200×10^9/L，一般PBMC分离清洗时可以把降速降到600rpm左右，这样血小板会被大量带走，培养起来也就更放心了。1 ~7 G* k6 h4 @( _& |5 y- L

gengtongyu521

回复 yizuiqiannianga 的帖子
: U9 \( S0 P- Q( a2 Q3 {8 ^3 w. M+ j8 h( |3 S  r! N4 A
恩，不是血小板的问题，是没加自体血浆的原因。

yizuiqiannianga

血小板没什么影响啊，一般几天就死了，细胞本身的原因

ccst4838318

回复 gengtongyu521 的帖子1 q3 h7 ]6 p& h  j- x/ U
! B5 c: P1 Y0 i$ i# z
我觉得你CIK培养不起来可能有几个原因：2 U! z: D: s1 V7 k
1.你分离的PBMC活性和种植密度首先要控制好，活细胞按1乘10的6次方/ml种植
$ G0 D5 [. D0 E( r7 m  N2.细胞因子没问题的话，也要看看因子的浓度是不是有问题，能不能很好的刺激诱导PBMC生成CIK，更重要的是能不能后期维持CIK生长，再就是你加的细胞因子组合和添加顺序是否适合CIK生长8 K& |' C! h. I1 C- S
3.提供外周血的人本身身体就不好，淋巴细胞活性低，培养不出来很正常: F+ |! C: W9 X% g' l4 D6 K
4.血小板也好、红细胞也好，分离的PBMC离心洗涤两便就行没什么问题，影响不大

青云之上

影响不是很大，养一养会死的红细胞，不过太多也不好，会造成较多杂质，记得加自体血浆~~~

xinquan15

影响不大，查看下患者的病史和治疗情况，还有就是细胞的初始活率是多少，加字体血浆的话一般不建议超过1％。