组织块法分离脐带间充质干细胞，细胞爬出特别慢，为什么？

2013sp

我使用组织块法分离脐带间充质干细胞，但是细胞爬出特别慢，20天有的才开始爬出，有的还未有细胞爬出，请教哪些原因会导致这种状况。

452359357

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1 ~. S4 g0 g3 S2 l; V2 t
( A+ c( x* g2 L% E$ q& r4 @0 w: z是不是消毒的时候 消毒的时间久了 其实只需要10秒的时间 然后马上清洗的 还有就是可能是你的脐带本身的质量问题 是不是脐带剪下来过久了 等等 再就是培养基的问题了 是不是没加生长因子 胎牛血清等 考虑换培养基 （科研的话科研考虑用自体的血清试试）

dollar007

1、脐带新鲜吗？最好是24小时内的脐带。8 a! J8 K% u1 x. |/ q$ s  Q
2、消毒别太长，1-2分钟就够了。% J$ H  ?! W" x( k' W' W. K, J; a
3、脐带肉糜尽量剪碎，平铺均匀，空隙流出。
9 L: j: |5 L0 y# Y/ b% u4 g' R4、培养前期别动它。% g' ]. W9 k9 R% N2 |, w' t* _
5、培养基方面：aMEM、DMEM、DMEM/F12等都可以，还需补加10%左右的FBS。% U* ?8 o: J2 l

hefan1234

估计是贴壁没贴好，种瓶后微倾斜放置10-20min（加强贴壁效果），放入培养箱水平放置3-4day换液7-8ml，4-5day后换液（镜下观察可见部分颗粒周围少量贴壁细胞），4-5day后传代8-9ml（镜下观察可见大量贴壁细胞），3-4day后冻存，1T75培养瓶可收获500万-800万。

月_幻影

原因有很多啊，脐带来源是否新鲜？脐带提供者的身体状况？培养基是否加了血清和因子？操作流程等等……请问LZ的操作过程是怎样的呢？

tingfengshuohua

一般十二三天还没有爬出细胞的话，就不会再爬出细胞了，“二十天之后”还能爬出细胞的，我没见过

zhrt

回复 2013sp 的帖子* k" q( M9 U+ h0 u" A
5 |6 k3 N: U% F6 w2 U
1.脐带的新鲜度，最好是采集后立马实验# {5 V7 j2 j2 H3 F* Y
2.剪组织时一定要细
& L, k: ?1 R7 i+ I7 R3 \4 a- I3.接种密度要适度，接种的方式: c: e- T, H4 K# v
4.培养基与血清的选择

听不到

培养液里要加因子吗？不会只要MEM/DMEM-F12+10%FBS就够了吗？我这样养的细胞挺好啊。我觉得重点就是开始的时候充分用PBS（2%双抗），然后放入培养皿或者培养瓶后尽量少动。之前听到一种方法是分离血管后吸干pbs，置于培养液中剪碎，放于培养瓶中倒置培养一夜，第二天正过来并加培养液，基本就能确定贴壁了。然后隔天换液就行了，我没用过，不过貌似好用，反正我觉得重点就是少动。