iPSCs的传代和冻存

wshtcl

我用成纤维细胞诱导的人iPSCs，用的matrigel和E8。请问有谁知道用什么样的冻存方法好一些?
0 W  Q3 K% }' M4 w' J8 q7 f" ?再就是利用什么方法能够让传代的细胞很好的贴壁生长？我一传代就飘起来一片细胞.....

康小纬

我是刚刚接触hiPSc，专门去新加坡国立大学学习了一个月，他们那边matrigel养细胞用mFresr冻存，是stemcell的一个产品，用来冻存人的IPS和ES的。至于传代的话，由于他们实验室养HIPSc的技术已经很成熟了，他们还是用matrigel和mTesr来传代，不过，据说用nutristem来解冻细胞，其贴壁的效果更好

fwj81

hiPSCs冻存液配方：Defined FBS+DMSO+KSR media,比例是3:1:1

sunnyhuan0629

我们实验室的话，会在冻存和复苏的重悬液中加入一些rock inhibitor  一般终浓度为2-2.5uM  效果也还可以~

scottist

消化时用accutase消化，室温2min后弃去accutase，刮刀刮下来，轻轻加培养液重悬，避免ipsc细胞团块被吹散，冻存液中加入Y27632（rock inhibitor），复苏时也加Y27632，4h-12h左右换为正常培养液，时间长了易导致ipsc分化，这样可以提高贴壁率和复苏生存效率。