关于流式的一个简单问题 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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花饶然

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楼主

发表于 2014-7-18 16:47 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本人对流式细胞术并不在行，做的多主要是测细胞免疫表型，最近想做凋亡，想问一下，为何做表型检测时，抗体孵育完毕必须洗涤细胞两遍，但是做凋亡的话好像说明书上都孵育完不用洗涤的，通常用Annexin V荧光抗体和7-AAD核酸染料，想问下这是为什么？

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沙发

发表于 2014-7-18 18:51 |只看该作者

做凋亡检测孵育完抗体确实是不用洗的，染完之后直接可以上机检测。表面marker的检测，抗体孵育完洗涤是为了洗去非特异性结合，降低假阳性率。

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zhouleiwang2

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藤椅

发表于 2014-7-21 10:44 |只看该作者

据我所知，用Annexin V做凋亡检测时，并非是抗原-抗体结合，而是直接利用对早起凋亡细胞胞膜上外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）有高度亲和力的、偶联有荧光色素的Annexin V蛋白做染色，由于Annexin V对PS高度的特异性和极高的亲和力，所以其非特异结合非常低，即便不洗涤也不会出现明显的假阳性。