SD大鼠间充质干细胞消化计数

meizi

各位前辈，我养的SD大鼠干细胞传代时第三代到第四代计数下来的细胞反而比第二代到第三代计数的少，您们经验一瓶75cm2的长满大约有多少？

avbn

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是不是细胞状态不好了，要不就是细胞操作过程中损失掉了

倒腾细胞

大家提原代和传代要计数吗

fangfang2016

你可以尝试一下用淋巴细胞分离液试试，或者接种后8h、24h换液试试

倒腾细胞

回复 meizi 的帖子" w9 n+ v, Y3 I; {

7 R" ~7 f* E5 b8 P8 o8 |高糖DMEM+15%FBS

meizi

回复 倒腾细胞 的帖子- h$ K0 \) @/ p% u

7 @3 h( d' U1 H. J9 s6 p* \* N 倒腾这么久才能达到75%的样子，你们用的浓度是多少呢？

倒腾细胞

回复 cyagen 的帖子
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“正常情况下我们是48-72h可以传代”  佩服前辈！ 我48h才半量换液

倒腾细胞

回复 meizi 的帖子1 |8 t' P  M+ {& A) ?. R

: e! y+ t# C1 Q; H起初FBS15% 第一代也要耗掉半个月？不会老化吗？

meizi

回复 cyagen 的帖子7 E  a+ e! `6 P0 C8 c: c

& r! c) z! m) v$ ^% w4 X就是杂细胞多，我用的是全骨髓贴壁法培养，前辈有没有好的方法能减少杂细胞呢？培养体系我用的是低糖培养液，GIBCO血清，起初15%，换几次液后用10%？前辈能给点建议吗？细胞质和量上不去，试验就没法进展啊,谢谢！

cyagen

回复 meizi 的帖子% b8 C- M7 {0 `' l
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原代提取的细胞前面几代生长都比较慢的，不过你这个有点过慢了，推测杂细胞太多，有活力的细胞太少的原因吧；另外，培养体系也很关键