低糖DMEM+FBS10%培养SD大鼠MSC，P0和P1代消化不下来啊很吃力。

倒腾细胞

胰酶应该是没问题的，因为之前用于消化高糖培养基的时候很顺利。前辈们在这里指点到的胰酶放箱预热也用了，还是大部分都死贴，消不下来。/ c1 Z- G2 ?/ _/ W
据说细胞老化的话，也很难消，下图为P1代细胞，貌似没有老化啊。还有什么原因会导致消化无力呢？望前辈们指点。 4 T4 @& g4 L2 }3 m* a1 K

cyagen

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大鼠MSC经过传代会逐渐纯化的，另外可能也跟胰酶的效价有关，我们实验室的血清是经过筛选的，选取10种进口血清，然后做克隆形成率的实验，选择一种最适合该种干细胞生长的血清。细胞是否长得好，排除个体差异之外，最重要的就是培养体系了，要是没有那么多经费做血清筛选，只能选择相对来说好一点牌子的FBS了。

倒腾细胞

回复 cyagen 的帖子
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今天消化P3代细胞 很顺利 好神奇 貌似操作跟之前都是一样的呀 另外请问下前辈专门用于干细胞培养的血清具体指什么？我们用的Gibco(北美), 经费非常有限太贵用不起呀

cyagen

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原代取材的细胞状态是否良好，有很多问题需要注意的，比如个体差异性，动物的年龄，原代取材时候组织杂质的去除，原代细胞接种密度，再就是培养体系，一般采用的是LD+10%FBS，但是FBS最好选用专用于干细胞的，这样可以缩短培养传代和纯化的时间

倒腾细胞

回复 yongganyixie 的帖子7 V4 ]. _  q" ?& q
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有这步操作 细胞还是下不来  今天消高糖的就很轻松 估计跟原代细胞状态还是有很大关系吧

yongganyixie

加胰酶后放培养箱消化，1分钟左右到镜下看一眼，看细胞消化得怎么样

倒腾细胞

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5 Y6 i% U' u3 d" a0 b6 z5 l* q9 N; N7 T我看这低糖的基本废了 那请问前辈 我用PBS洗了的还这么咋 主要是原代取材问题吗？有什么补救措施呢前辈？

cyagen

这个杂细胞太多啦，正常时间（1-2min）都没有消化下来的细胞就是杂细胞了

倒腾细胞

回复 爱飞的成成 的帖子
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好吧 可能取材操作问题太大。。。

爱飞的成成

我想说，你这个MSC很不纯