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低糖DMEM+FBS10%培养SD大鼠MSC,P0和P1代消化不下来啊很吃力。   [复制链接]

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楼主
发表于 2014-8-21 18:32 |只看该作者 |正序浏览 |打印
胰酶应该是没问题的,因为之前用于消化高糖培养基的时候很顺利。前辈们在这里指点到的胰酶放箱预热也用了,还是大部分都死贴,消不下来。/ c1 Z- G2 ?/ _/ W
据说细胞老化的话,也很难消,下图为P1代细胞,貌似没有老化啊。还有什么原因会导致消化无力呢?望前辈们指点。 4 T4 @& g4 L2 }3 m* a1 K
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发表于 2014-8-28 17:01 |只看该作者
回复 倒腾细胞 的帖子1 V/ X) y2 k) `
! F6 m  Z/ ?- J
大鼠MSC经过传代会逐渐纯化的,另外可能也跟胰酶的效价有关,我们实验室的血清是经过筛选的,选取10种进口血清,然后做克隆形成率的实验,选择一种最适合该种干细胞生长的血清。细胞是否长得好,排除个体差异之外,最重要的就是培养体系了,要是没有那么多经费做血清筛选,只能选择相对来说好一点牌子的FBS了。
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发表于 2014-8-27 14:32 |只看该作者
回复 cyagen 的帖子
+ W* d! y- T$ |! Z9 p' p" K$ s& C  }
今天消化P3代细胞 很顺利 好神奇 貌似操作跟之前都是一样的呀 另外请问下前辈专门用于干细胞培养的血清具体指什么?我们用的Gibco(北美), 经费非常有限太贵用不起呀
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发表于 2014-8-27 09:21 |只看该作者
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回复 倒腾细胞 的帖子/ J5 X' B3 C6 d/ Z
* S- F" T: S* q  Z8 s
原代取材的细胞状态是否良好,有很多问题需要注意的,比如个体差异性,动物的年龄,原代取材时候组织杂质的去除,原代细胞接种密度,再就是培养体系,一般采用的是LD+10%FBS,但是FBS最好选用专用于干细胞的,这样可以缩短培养传代和纯化的时间
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发表于 2014-8-26 16:21 |只看该作者
回复 yongganyixie 的帖子7 V4 ]. _  q" ?& q
0 B* L4 v/ ~% a9 Y* G
有这步操作 细胞还是下不来  今天消高糖的就很轻松 估计跟原代细胞状态还是有很大关系吧
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发表于 2014-8-25 22:08 |只看该作者
加胰酶后放培养箱消化,1分钟左右到镜下看一眼,看细胞消化得怎么样
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发表于 2014-8-25 16:17 |只看该作者
回复 cyagen 的帖子
/ _$ s. U' [6 R6 A0 T
5 Y6 i% U' u3 d" a0 b6 z5 l* q9 N; N7 T我看这低糖的基本废了 那请问前辈 我用PBS洗了的还这么咋 主要是原代取材问题吗?有什么补救措施呢前辈?
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发表于 2014-8-25 15:31 |只看该作者
这个杂细胞太多啦,正常时间(1-2min)都没有消化下来的细胞就是杂细胞了
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发表于 2014-8-22 17:27 |只看该作者
回复 爱飞的成成 的帖子
; }8 y1 k% L' M! S& r0 U+ R; T) p) z. W  _, e( W
好吧 可能取材操作问题太大。。。

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发表于 2014-8-22 15:36 |只看该作者
我想说,你这个MSC很不纯
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