关于悬浮细胞免疫荧光

懵懂干细胞

那位大侠做过悬浮细胞免疫荧光，效果怎么样？能否经验分享下？9 W' n5 c% M3 D7 K- I2 Z
PLL玻片哪家公司的比较好，丙酮固定液哪家的好！ 麻烦给些建议。谢谢！！！

shaozi402

悬浮细胞免疫荧光也需要包被板子使其贴壁生长，然后才能免疫染色吧

小木梅

第一种：参照血液中细胞染色的涂片法，先调整细胞浓度，准备普通用于组化的载玻片，取20ul悬液滴在载玻片上，涂开，面积不用涂得太大，然后用吹风吹干或者烘箱37-60℃烘干，几分钟就弄干最好。然后-20℃储存也可以，或者直接按照冰冻切片的步骤做免疫荧光。基本不会有太多脱片。第二种：直接悬浮染色（类似做流式时那种，直接在离心管里面，洗涤的时候需要离心），我之前用这种方法，总是到最后得到的细胞量很少，跟离心估计有关系，有些说固定后细胞变脆了，离心力大了细胞容易破碎，有些说固定后细胞密度小了，应该加大离心力，我没太去珍惜琢磨，感觉应该是第一种原因，因为我试过增大离心力，还是细胞少。我后来都是用的涂片法。

小木梅

固定液的话 ，都可以吧，我用4%多多聚甲醛，步骤普通免疫染色一样

懵懂干细胞

回复 小木梅 的帖子# ^8 b7 b5 y7 e+ {9 A, y2 h
# u1 Z7 h: i) y3 M
谢谢！下次试试

懵懂干细胞

回复 shaozi402 的帖子
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( R' \1 x/ N% }, ]3 W! t应该不用吧

bin

回复 懵懂干细胞 的帖子) {. H/ x- g1 n; O# d4 @0 X

* u4 h: V1 E% t! }! |悬浮细胞群做免疫荧光关键点是细胞球贴壁。用PLL包被的玻璃板贴上就好，关键是贴壁时间，时间长了细胞全部爬出来，没有球的性质，时间短了清洗过程中很容易掉下来。其他的没有问题，PLL，玻璃板，甲醛或丙酮买国产的就好。如果细胞球过大，里面的细胞可能不好染色，可以教你一个诀窍，把细胞球固定好了坐冰冻切片，这样可以找到非常好的切面，做出来的照片非常漂亮，但是细胞球做冰冻切片是一项技术活，一定要做很多，碰运气才能找到合适的切面。
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zb_ming

PLL我们用的sigma的挺好用。悬浮细胞荧光就用贴壁法，楼上所说，早几年前做神经干就那样做的，效果不错。

watchen198891

可以做成冰冻切片吧

懵懂干细胞

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3 X; w8 G- t1 `' c3 s& k谢谢解答！ 不过我做的不是干细胞球哦！ 是悬浮肿瘤细胞K562