怎么总是提取不是小鼠的前脂肪细胞，求救，望协助

hellovietnam

如题，取小鼠附睾脂肪组织，切碎，放置0.2mg/L的胶原酶II中消化2小时后，200目尼龙晒过滤，之后啥也没弄到，连续三次了

刘慧瑾

坚持下去

lovesxj941

首先消化时间过长，选取40分钟，提取一部分，再消化20分钟提取一部分比较好；另外为什么选用附睾周，腹股沟区不是很好嘛，除非你有特殊要求另当别论；酶消化完脂肪后，会是乳白色液体，是这样吗？另外的一些细节，多看看文献吧。

hellovietnam

lovesxj941 发表于 2014-9-26 10:35 ; M* g6 P" n2 J: y
首先消化时间过长，选取40分钟，提取一部分，再消化20分钟提取一部分比较好；另外为什么选用附睾周，腹股沟 ...

: A) C9 ~7 Q0 P/ t/ _$ V3 p你好啊，我打错了，是0.2mg/L的胶原酶II中消化1小时，但最后看到的是组织基本没变，也没融成乳白色液体，是不是我用错消化液了。我昨天在这里搜了文献，说是胶原酶A，是不是胶原酶I。前辈是用什么消化的

lovesxj941

可以用一型胶原酶消化的，二型胶原酶可以消化软骨一类组织。

荷荷

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这两种细胞的分离方法是不一样的，你再查下文献，脂肪干细胞一般0.075%1型胶原酶消化30min就可以了，至少我是这么做的；前脂肪细胞一般采用天花板法，即将纯化的脂肪颗粒加入培养瓶中，充满培养液，将培养瓶倒置，使脂肪颗粒贴于培养瓶顶部（也即正常的培养瓶底部），1周后可有细胞爬出。

pinger1203

1.酶用错了，应该用Ⅰ型，浓度0.1%，即1mg/ml。2.消化时间改为50～60min，37℃，振动消化。

moluxingke

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: {; g; f# ?  F5 L您好，请问您做小鼠的脂肪干细胞分离培养吗？有没有protocol可以发一下吗？谢谢