求助关于MSC成软骨诱导以及鉴定的问题

听不到

做MSC的成软骨诱导已经n遍了，始终不成功，用的是gibco家的成品诱导液，也是按说明书做的，但是镜下观察就是感觉没什么区别，然后阿尔新兰染色出来的结果感觉和大家发出来的也不一样。觉得好奇怪为什么大家能做出圆圆的细胞....5 e9 T+ d6 |. K+ o# G3 t% N
我的阿尔新兰染色过程：1%阿尔新兰配制：1g阿尔新兰溶于100ml的3%醋酸水溶液中。
6 r) c8 T. @" @6 n7 A! g成软骨诱导MSC14天后，4%中性甲醛固定30min，3%醋酸水溶液洗1次后，1%阿尔新兰染色10~30min，3%醋酸水溶液洗。镜下观察。9 v5 r. `: h" u0 Q' B
求助我的鉴定过程有什么不对的吗？还有诱导过程有什么需要注意的吗？谢谢~

听不到

这是我成软骨诱导后的阿尔新兰染色图片
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6 Q2 y5 O  Q4 c) i2 r这是对照的阿尔新兰染色图片5 l! ]% h+ Z& G

# V( r: L  p: i: F求大神鉴定帮忙！！！！

sunnyhuan0629

你这个对比照片是什么细胞？对比图也不是很清晰。。。

听不到

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对比的也是MSC，但是没有诱导，是正常生长的，是我照的不太好，但是很明显的没有诱导的那种聚集到一起的染色点出现

sunnyhuan0629

回复 听不到 的帖子+ ^2 m$ }+ }) F3 U4 F" m
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恩，看起来是有小圆点，很奇怪~会不会是你用固定液处理细胞的时候，浓度或者时间掌握的不对？如果你跟对照是一起处理的，那就可能是诱导过程的问题了。有时候我们自己做的诱导，会发现处于不同诱导时期的细胞，得到的染色结果差异很大。可能是诱导到了细胞的不同阶段，比如老化的细胞就没有处于对数期增长的细胞染出来的效果好了。不晓得能不能帮得到你哈

fuyinsheng

我觉得你的细胞接种密度太大了，细胞在换分化培养基后，不是马上停止生长的，是需要一段时间缓冲，接种密度过高，会导致细胞成团的阻力加大，不能使分化的细胞与分化的细胞有效分开。我也是经过反复的密度接种试验后才发现的，一般24孔板涨到80-85%之间换分化培养基，效果不错