western 检测的蛋白表达量太少怎么办

yuanyecat

如果你熟悉流式原理，明白流式只能看到检测部分的情况不能说明你的所有样品细胞的情况，可能只有10%很强，其他很弱，! G* k! y9 A" g0 m8 h3 T  s
我的建议是：6 ]/ @' ~! ~3 V5 ^; V/ [
1.首先看看抗体的特异性是不是很高，你有阳性对照吗？) L" t$ G4 d) Y5 h
2.再者，如果不是特意性问题，可以用专业的试剂盒浓缩蛋白看看。* g4 C1 A, \" B
3.还有最后显色的时候，可以用超强显色的试剂盒，如超敏型辣根过氧化氢酶DAB 显色试剂盒

yuanyecat

如果你想用富集，蛋白富集有很多种方式，3 ^- M+ z; P7 j# r" P- x0 S: }
1，购买富集试剂盒，如life tech或者biorad，
) M# H4 }, p6 w& ~/ @( c( ^2，冷冻干燥细胞提取液，* n3 Z4 g2 s( h4 @  ^' ~
3，用层析柱的方法

yuanyecat

但是有时，我不推荐富集的方式，富集会使蛋白变性，你可以用超敏的显影剂，这样可以检测到微量蛋白