关于MEF饲养层的制作，自己的一些总结及疑问，请拍砖

ceshishua

feeder制作方案：: e0 s) u. v4 @' D0 q
1、铺板前丝素处理
4 Z# e& ]& s2 `+ m/ v7 r' J" ]1.1：复苏----扩增----丝素处理----消化/计数----传代铺板----过夜，12h后使用/ o1 N! K) D* X+ u6 [1 N0 h
      优点： 此方案可保证了feeder的细胞密度，便于把控。
$ Y( F5 a$ g& C. L  j+ n0 Q      缺点： 但是由于复苏后扩增的MEF是过量的，且丝素处理后最多3-4天内使用，所以会造成MEFs的浪费。
( Z# y5 G: l; z$ k1 O) n2 S1 s- }. d9 a! B# N' k# l
& ]1 p3 P! x; c3 s& n
1.2：复苏----扩增----丝素处理----消化/计数----冻存----复苏--（复苏多久后？）--使用4 k2 \/ v2 A- a: I- H
    优点：此方案在丝素处理后对多余的MEF进行了保存，减少了浪费。8 R+ |# G& G6 L8 T
     缺点：但是复苏的inactivated MEFs存活率不宜控制，则造成feeder的细胞密度不易把控。
& D- @( u5 _/ _9 Y* _: ~+ R9 T
: N4 z  A( h. K8 O, Q) I! D7 q
; h0 A7 l: @" A( H2、铺板后&使用前丝素处理3 t; X4 F# I/ f6 n! Y
2.1：复苏----扩增----消化/计数----传代铺板----丝素处理----过夜，12h后使用
6 [0 O( S! k1 H: V0 l! t+ @   
" a' [" n( {! ^: I  ~优点：无特别优势，只是将方案1.1中“丝素处理”一步移到铺板后进行。
- |, _4 d5 P: g1 b. m* x! G     缺点：1.1缺点+丝素清理的干净程度不如“铺板前丝素处理方案”4 a% `: V" A% {4 }
. }5 u* l; m+ V$ S! A; I3 Q/ b, u

2 e1 E! O7 O# a/ y2.2：复苏----扩增----消化/计数----冻存----复苏--（复苏待细胞长至合适密度）--丝素处理----过夜，12h后使用4 d( N* p9 ?1 K! {; C3 Q
   6 V, T3 l2 T7 f
优点：此方案在某些条件下弥补了1.2的缺点：只是在feeder细胞数不足的情况下还能等其长到合适密度再进行丝素处理。
' \2 i8 m  }( z0 M     缺点：丝素清理的干净程度不如“铺板前丝素处理方案”3 a  x, A) o/ g, _- p( L
; W$ a3 [1 w8 t: C0 h. y- P2 p# A
3 p" e% _2 o) T% }" W9 }/ y
两个问题
" Y7 v! Z  H  p/ W' ?# ?, H) }6 {关于明胶包被：我们用的塑料细胞培养皿，本身贴壁效果不错，感觉不用明胶效果无差别。请问明胶的使用是否必要？除了促进贴壁还有其他什么作用？7 b8 f% O6 `2 S
关于MEF的培养基：丙酮酸钠必须吗？含不含HEPES是否有影响？血清有无特殊要求？Gibco的方案中建议使用ES Cell-Qualified FBS，看起来比其他的他们家的FBS品质级别高些，这应该是故弄玄虚吧，有无必要非得那么高级别？* v' A; d' d1 i+ j9 i2 ?

( A: j7 p# K" f9 E: r4 C
6 j2 t0 g' q. M, l

ppcl2

塑料细胞培养皿一定要用质量很好的，即使这样也要明胶包被！3 d9 x' K1 p0 Q7 B+ J- j
MEF的培养基血清无特殊要求，一般FBS就可，但铺ES前要用少量ES培养基洗一次。2 G5 O) \# B% R1 ?! _$ e

* Y/ B5 T1 ]) n" o. A- b3 Z# d1、铺板前丝素处理feeder制作方案明显好于2、铺板后&使用前丝素处理！
7 u! }5 `* _/ _! |. Q) E, Q  ?) m铺板后&使用前丝素处理，不能完全去掉丝素残留，有可能对ES培养造成危害。

mecol

回复 ceshishua 的帖子. W8 P, l. ]2 ]- N( r: x
2 s2 x% S) M; j6 r- g
建议明胶包被！因为你的feeder是要使用一段时间的，不是1-2天。经过有丝分裂抑制后，其会慢慢从板子上脱落的。$ M9 {7 i% f9 N8 b8 a
丙酮酸钠不一定需要。血清不必使用太好的，国产的足够，Gibco的有点大材小用。% c" A' ]6 ~$ |) p. R
楼主的冻存液是什么成份啊？