need your help 培养方法，配方与之前培养时一样，未出现过这种情况

绝对忠橙

大鼠bmsc' C  [6 s' x! p4 R: D
1.复苏后4个小时可以看到细胞贴壁，单个细胞约1/3贴壁。但是24小时后细胞全部浮起，培养基无悬浊物析出；* X  |7 ~7 \6 P* T' V& l
2.提取原代bmsc，接种后两天可以看到极少数细胞贴壁，但无集落出现，2天后换液时无细胞贴壁。
* o" f8 q9 h. R培养方法，配方与之前培养时一样，未出现过这种情况，请教大家这是为什么？

zhangzhenhuayy

会不会是支原体污染？如果显微镜里看不到异常情况，但是细胞都浮起来不贴壁了，很可能是支原体污染，我之前都碰到过，不过我养的是草鱼肾细胞

jingjing

问题1：适当延长培养时间再做观察，如果细胞没有好转迹象，基本判断复苏失败。原因比如冷冻解冻不当对细胞的损伤，冷冻前细胞活力不足等。要根据自己的实际操作进行分析。* P) ~" {' W3 }% j! X

- |1 ?7 E* C6 N8 h/ b9 ^问题2：骨髓原代提取MSC，两天后贴壁细胞不会很多（骨髓内干祖细胞的比例有限），贴壁也不会很牢固，换液有可能会有MSC细胞的丢失。
7 }; J7 D5 F) i% j8 c3 b1 A6 |; D1 x6 n; I, S
一次实验失败不代表什么，多尝试几次。最主要是学会怎么发现问题，分析问题，解决问题。

倒腾细胞

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4 {7 `& L8 A* v  H$ f/ y4 l: Y
& @$ k* Z. p7 d哦？如果显微镜里看不到异常情况，但是细胞都浮起来不贴壁了，很可能是支原体污染

倒腾细胞

回复 绝对忠橙 的帖子! |. g  i" g8 P( R. ~
! o5 N% W- H- N, K7 ?/ m1 t! E
你用的是什么培养基？养细胞不要心急  温柔待之

zhangzhenhuayy

回复 倒腾细胞 的帖子2 [( o! x0 @% Q. c

( c; {$ [! o$ s- g) F, w) u我当时的细胞不只是不贴壁，而且也基本不生长，感觉细胞数量也越来越少

lic126

培养液是自己配置的不？血清有更改没？我们当时同品牌血清，更换血清批次都有出现过该类问题，再更换批次，问题消失。即使GIBCO血清，也偶尔会出现质量异常或不佳的情况。所以不同品牌或同一品牌不同批次，都有可能有很大差异的。

绝对忠橙

回复 zhangzhenhuayy 的帖子
7 {2 y+ f4 x: E& z' h& j5 D
8 {: `3 D( g, c* N& b) L我也怀疑过支原体污染，于是把血清，培养基，pbs，胰酶都换了，还是不行。于是我借了点儿细胞，培养基也是借的，仍然这样……

绝对忠橙

回复 jingjing 的帖子
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3 Y& W9 i$ A! T0 \好的，谢谢

绝对忠橙

回复 倒腾细胞 的帖子+ n8 M) y# E5 c% x- h4 z' G

3 n$ o$ l% J9 Y1 T1 b3 I我也怀疑过支原体污染，于是把血清，培养基，pbs，胰酶都换了，还是不行。于是我借了点儿细胞，培养基也是借的，仍然这样……