请教各位老师有关流式检测CIK细胞成熟程度

baby00000003

CIK培养第六天，按照常规方法，2.5小时分离，加IFN-gamma，大约26小时加anti-CD3、IL-2、IL-1a，最长3天换液1/2，培养基变色立即换液，保持细胞密度不超过2*10^6/ml
  T: m$ C4 f# l- d
% a& M3 S) U( g  g今天取细胞样本跑了个流式，但是CD3，CD56阳性率很低的说5 ?+ |" d6 ?! D" [8 K4 w% Y
下面是这次跑流式的图，1 S& m7 L: ^% Q: n
因为前辈遗留了一部分抗体，都是PE的，没法做双标，不过第一次实验，当作是趟地雷省着凑合用了4 Z  l1 ]; Z. V8 n5 T. T( d. p3 }

6 z# p- o' i: R+ B" L想请教各位老师，
, b, i' c$ y: i2 |1 _有可能导致CD3、CD56阳性率低的原因？, q  l/ |9 ?" ^& n7 k
有关FSC和SSC画门，像图上这样画是正确的画法么？
0 r) O( q$ K( P% h4 ]1 _4 C% J我觉得如果靠诱导单核细胞成熟而生成CD8，是不是应该像这样把单核和淋巴都画进去呢？. q1 v9 v: P/ j8 h

dollar007

1确定下你的试剂有否过期；
. D  o8 |# a0 A  l& l6 F/ q; i0 j2对照FS/SS分析图中，碎片和死细胞过多，设的门框了部分碎片和死细胞；可以通过调高FS域值屏蔽掉部分无关数据信号；+ q' _6 z/ K9 G! C! ?# ^
3对照直方图中，单线门设的过右，就把它设定在右边锋和X轴交叉的地方，拖尾的部分可以容忍，一般对照不会出现，细胞养不好，制样差就易出现；
, L& p" A" U* k( u# D0 K* N  h4然后再看看你的样本数据分析，是否双阳提拔起来了？

baby00000003

回复 dollar007 的帖子7 x& ~# d0 I# `2 D) s

" O. s; B, V" \3 ^. x' `/ }& u您说的门框内的死细胞和碎片指的是哪一部分呢？
* j( x* J, _) g- n' o+ Y* i) \7 o是说70/70范围之内的都算么？2 C  J# V) B9 a, X( ?- Z6 @' ]
我还以为最角落里的是碎片，临近角落的那一群是淋巴细胞......

dollar007

左下方的是碎片；目标细胞在你的图中靠下方一点；左边的是死细胞。

dollar007

你培养过程中，要更换培养瓶，这样贴壁细胞就去除了；分离后红细胞残留不多，在培养中不增殖，很快就会成为劣势群，比例不高。

lyj-0017

回复 baby00000003 的帖子
- H+ c( Y, l) u/ M/ b+ U2 V7 X+ Z' j
从你的同型对照来看，阈值可以设的再大点，去除更多无关信号，圈门没啥问题，CD3单阳结果还凑合，CD56单阳的结果我认为可能与你培养没多大关系，估计跟你的抗体有关。你用的CD56-PE是哪个公司的，克隆号是多少？是抗人CD56抗体吗？

baby00000003

回复 lyj-0017 的帖子8 @0 Q: I4 x) x

$ o6 b' T8 J% I& y! t* P$ H是BD的....555516,包装上说2016年才过期.......

lyj-0017

回复 baby00000003 的帖子5 b; A9 \/ [$ A6 m! p+ [3 w) x2 ^

, m- B; ]# G. z一般常用于检测人CD56的克隆号为NCAM16.2

hyg5481655

回复 dollar007 的帖子
; l* l- o5 U+ c; a6 `7 {9 @3 Q
- C$ `) D3 U: Z5 r/ F8 T请教，调高FSC阈值，比如到50，000左右，除去部分碎片和死细胞，圈中的CIK那一群细胞的比例大概有多少？

细胞海洋

回复 hyg5481655 的帖子+ Q( L  a7 i8 }1 m0 G
4 u5 K! E: o" b) f; M! B! r: x
建议你发新帖提问