培养的脐带源间充质干细胞做流式检测总是不合格，这是怎么回事？

309208770

分离出来的MSC，经过一段时间传代，P1代做流式检测，不合格，P2代也不合格，是因为代数太少，细胞纯度不够吗？

791849046

检查你的抗体是不是有问题，建议你细胞在做流式的时候最好在3代以后。

mantianfeiyun

一、细胞培养过程中可能存在的问题易造成杂细胞过多：" \. t$ m5 ^, V0 s3 J( P  r
1. 脐带外膜未去除
: i. y- \: Y6 D( f% y& i2. 脐带两条动脉、一条静脉未去除
- L% p5 c/ ^/ \. B+ k9 k- j! `# H& A2 |* R8 m
二、流式检测过程中存在的问题易造成检测失败：
  ~1 X* C1 ^" {+ g0 J1 k1. 流式抗体各荧光素搭配不当
1 W# P: E- M; d; ~- p' V3 v) g2. 同型对照设置失误3 r/ |# A  h  e; L1 [9 Q
3. 抗体孵育应避光、4℃0 F; Q: P0 g0 K
4. 门的选择错误
7 O* I7 Q0 ^5 D/ E$ G3 `4 K5 e2 U9 ~5. 每一个样本的数据获取至少应检测1*10E6个细胞，以达到足够的样本量
" `. w; X: ?3 Q1 I& A, j1 |, n) W6 B- K  C: E8 o

fduhoward

回复 309208770 的帖子) G. R  N' I. `7 d  [6 \* _
+ x; R( M9 ^- K) I# ?
剥离，两根动脉一根静脉

duwenjing

组织贴壁法的纯度可以吗？只要去除膜和血管，直接培养华通氏胶就可以得到期待间充质干细胞是吗？

cleargreat

那就是细胞纯度不够，流式筛选或者重新制备吧。

309208770

回复 fduhoward 的帖子+ |! |( r. [' D5 D

. V) y9 H$ ~" A, b% ]怎么样除去血管？止血钳剥离吗？

309208770

回复 cloudycity 的帖子0 y) j  O( M8 c+ ~; Q
8 t7 h3 d! G, N$ X7 A
组织块贴壁法，直接剪碎就摆在培养瓶上了，去血管的方法使用止血钳将血管剥离开吗？我也曾经试过，但是操作不好，现在想想可能就是方法太粗糙导致杂细胞太多了

cloudycity

具体得看你怎么分的吧，还有哪个指标不合格···具体问题具体分析··· 反正去血管去膜的华通氏胶爬出来的，基本都可以过关。

dollar007

请上图，帮你分析。6 R- \7 _4 @; W$ F
我们实验室做的，不论消化法，还是组织块法得到的MSC，在P1代阳性标志物都大于95%，阴性标志物小于2%。