关于脐带间充质培养的问题

大少爷

主要原因应该还是培养方法的问题，我们一般会去掉羊膜和血管，剪切成 1~4mm3的组织匀浆块，每T75瓶接种 0.5~0.6g ，9ml培养基，培养第 5~6 天进行全量换液（这期间不作处理），将培养瓶中的未贴壁的组织块和旧的培养基一起合并转移到 50ml 离心管，离心去上清，培养基再重悬，等量均分到原来的培养瓶，然后定容至 10ml/T75 培养瓶。全量换液时其实有好多组织块并未贴壁，不用担心，继续培养，正常情况在8天左右就会有细胞长出来，在11天左右进行一次半量换液（动作缓慢，吸7加10）即可，这样细胞增殖就很理想了。如果在11天左右换液时还是没有细胞，也不用担心，继续培养，15天左右再进行半量换液，继续观察和培养，期间尽量减少培养瓶的晃动。17天左右没有细胞长出来，估计就是其它问题（脐带问题的可能性很小），培养过正中尽量用新配制的培养基。
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听不到

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能问下你酶解法是怎么做的吗?想加你好友或者留言之类的都没权限...

nkcell

首先用的培养基有轻微的碱性，组织块剪好之后直接加到培养基中，放入培养皿中培养，五天之后换液，组织块基本就都贴了，再过两三天就会长出很多的细胞

维维睡啦

不用倒置，第一次培养基添加量过少，如果是150瓶子，建议加10-15ml，前6-7尽量不要换液也不要动它，第6、7天变量换液，一般第6、7天就能观察出克隆出来的细胞了。前期培养要耐心。

chenlin080102

我还是喜欢用酶解法，这样不用在前几天注意培养液液量，酶解法5天就能长出很多细胞，而且间距均匀，大大缩短收货的时间，半个月能收到第三代

水念人倦

给楼主一些个人建议，个人觉得组织块2~5mm3是最好的，能贴住，换液也不会因为太小被冲起来。& s% `2 W1 n5 c+ j$ n

* C0 G& q8 Y7 I$ ?7 q, q原代培养的时候加液的高度以即将浸没组织块为宜，然后放好了就不要碰了，换液时间可以再长一点，三天换液很有可能破坏微环境，有可能不利于生长。
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/ g  R1 }& r  y- v' w7 W之前我个人做过几次对照，用的是75的瓶子原代培养，3天换液的加4ml，6天换液的加6ml，几组结果下来明显6天换液的细胞数量更多。
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! u+ R% v3 _/ |" I希望对楼主有帮助吧~~

1233hyp

个人认为：其一，是不是你脐带本身的问题，会不会放太久了？一般从采集到处理中间时间不超过24h内处理为好；其二，先把组织块撕细点再剪；其三，如果做贴壁的话，最好在剔除羊膜，静动脉后不要清洗，否则不容易贴壁；还有就是会不会培养基的问题。

1233hyp

个人认为：其一，是不是你脐带本身的问题，会不会放太久了？一般从采集到处理中间时间不超过24h内处理为好；其二，先把组织块撕细点再剪；其三，如果做贴壁的话，最好在剔除羊膜，静动脉后不要清洗，否则不容易贴壁；还有就是会不会培养基的问题。

snowny007

如果是不贴壁生长的话，有以下几点建议：组织块接种密度要适宜，不宜过大或过少；组织块大小对细胞爬出的影响不好区分，小个组织爬出的细胞会很快，但不易贴牢，大个的组织更容易贴住，但爬出的慢，个人经验组织在0-3cm之间均是可以的；另外初次培养液体量应该是以少量加入和长时间培养为宜，不宜早换液，全量换液和半量换液均可，个人推荐全量换液，因为全量换液后可以保证更长贴壁时间，我们用的培养基，细胞爬出时间都在第一次换液后，第二次换液前。

colins

组织块大小控制在1-2立方毫米，换液时间等到7天后，细胞从组织内爬出来是需要很长时间的，期间不要移动培养皿。再就是你的培养基有没有问题，该加的因子、血清（或者替代物）是否都已经加了