胚胎干细胞怎样传代能让克隆团大小均一？

UC-MSC

如题。 由于要用iPS做EB分化，但消化下来的克隆团都大小不一，形成的EB也是大小不一。所以想请教传代时怎样操作才能保证克隆团大小一致。谢谢！

genedu

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% H# b6 ?* x* \梯度稀释，基本上就是single cell长成的克隆，那样的话，时间和形态都会比较一致，而且克隆的体积也是比较大

riverdtang

消化下来克隆置于15mL离心管，用移液管吹打，成稍小的克隆，使其自然沉降1-2min左右，弃上清，此时非常小的克隆就去掉了，然后再加2-3mlPBS，重悬克隆，使其自然沉降1min左右，弃上清，能进一步去掉小克隆，沉降的时间和你第一次吹打的力度还有传代前的细胞状态有关，这个要靠自己摸索。主要就是根据大小相近的克隆沉降时间一致，过小的克隆会被你弃上清去掉，过大的克隆会优先沉于管底，中间的是大小一致的目的克隆。