请教流式达人帮忙看图

baby00000003

先上图2 x! k4 [8 @& I: }* B

2015-5-21 14:18 上传

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8 c$ K' M  U& b0 |: r: i" B3 J; L* ?

2015-5-21 14:18 上传

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; Y, f, g, n+ v/ o% T
这是同事做的1个CIK细胞样本，培养时间、条件、制样过程一概不清楚% b6 A' `% H/ }1 P" O9 V" M$ o. c8 B" o
想请教各位有经验的老师们，为什么图上的细胞没有明显的CIK分群呢？  r* u3 H/ F/ Z+ q0 f
图上圈绿色的一群是为数甚微的CIK么？" j5 b4 g& p- O; S0 v: k5 V- X4 M
图上红色的一群应该是细胞碎片吧？
; ~5 {5 \7 x; w  N& G/ L7 K那图上蓝色的一群又是什么？5 W6 R  v# M5 \& L

$ E1 y( a& y% L追加信息：# R/ Q7 ]+ A' F" P/ Z0 |
1，右边的图是CD3-FITC／CD56-PE的双标荧光，据说圈中图上蓝色一群几乎没有任何阳性荧光2 D: G' Q  i- f! v/ Q
2，镜下观察细胞有非常明显的老化形态，如边界不圆滑，颜色暗淡。即使形态尚好的细胞也看不到分泌颗粒( b3 J- n0 N/ U) h% r" A/ i1 b
3，细胞来源为健康的年轻人，无不良嗜好，采血前无饮酒、服药等行为
* B1 V- ^& y, r1 r. Q. s% o4，采样时间为培养开始后的D14. o( d& M9 @" o, r" m9 {

$ j: L5 c: p6 D( g( l' ^麻烦各位老师帮忙解答～

baby00000003

回复 lccsiais 的帖子
0 Z. |6 ]1 @- ^( [3 }& D) G! H7 y3 }8 K) C( O& X& _; O
多谢解答，俺会第一时间转告～

baby00000003

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! {; I$ P, {6 O! n. ^; w
9 w4 b) }6 R* V1 n# T1 q% m- J多谢解答，俺会第一时间转告～

lccsiais

嘿嘿，散射光图上圈了门，你FITC-PE图上也没有把绿色门的细胞单独显示出来，不好判断。另外图上阴性细胞群顶上那黑色细斜条都是死细胞/活力不佳的细胞，看样子这部分也太多了点。可以加个DAPI，sytoxblue什么的（405nm激光激发），染一下死细胞，把它排除（绝大部分）。
4 g- v; L( |- d不知道这是怎么测的，用561nm激光激发PE，不受FITC干扰，几乎无补偿了。

ccst4838318

回复 baby00000003 的帖子/ `% q. N5 U! J. R5 j: A8 H6 V
/ f7 Z* i  S$ [. I
绿色圈就是CIK大概的检测范围了，但是你这也太少了，基本上全是转化成其他淋巴细胞了，调下补偿和电压吧，效果图或许会好看一些，但是单看图片，你这DC-CIK诱导的效果是很不好，检测出来估计连10%都不到吧

元杰5

回复 baby00000003 的帖子+ w1 i* l( }+ j  p

& K  v5 o) f* Q我看的话，FSC/SSC图只表明细胞的大小、粒度等特性，跟是否表达某表面抗原没有关联

baby00000003

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4 ~* j% s) t% p3 K% D& V" v! u" K. b
据说就是这个绿色的圈稍微有点各种阳性，多谢解答，俺会及时转告滴～

Jonathan

SSC-A跑出去了好些。下次电压可以调低一点。

元杰5

能先做个荧光补偿吗？……红色圈一般认为是碎片，绿色圈没有明显的参考价值，