求助，关于脐带间充质死活爬不出来...

baicaikua

一般会将华通氏胶剪成肉糜状，然后混合培养基放在培养箱里就好了啊。没什么特殊的，样上后就轻易不要动了。7天后将培养皿略倾斜，洗出培养基，在缓慢加入新培养基。感觉关键点是间充质干细胞是贴壁生长的，所以组织块要贴在培养皿上，不要频繁晃动，要是把组织块晃的漂起来会影响细胞爬出的速度。至于培养基没什么太大的要求，最基本的培养基就可以养，比如DMEM/DMEM-F12/1640什么的都可以养的出来。) V5 S; p! @: @
       总结：组织块能剪多碎就剪多碎。如果需要可将组织块均匀放于培养皿上1~2小时等与培养皿黏牢后再缓慢加入，不要使组织块漂浮，（可以相像水里的暗礁那样）又或者可以用少量FBS先铺板再加组织块（放置组织块飘起），然后再加培养基，一切加好后放培养箱里。一周后再换液，动作轻柔缓慢。一般两周可以出细胞了，最多3周吧。还有加双抗影响细胞的长出速度。还有看你第二张图好像细胞出来了啊。
; Y" A0 R$ ?4 M2 W& L- w2 G% D       如果以前的细胞都长得出来就这次的长不出来，正常只有两个可能，培养基和组织块的问题。% R0 T, K$ F5 m' l1 A4 O( u
       1. 培养基是成品还是用粉剂自己配的。成品的话是不是过期了，保存是否得当，粉剂的话除了过期和保存的问题，PH调好了么？
; q: b& n2 R' g       2. 组织块是新鲜的还是冻存的，会不会冻坏了？冻存过的组织块就算是好的，爬出的速度也比新鲜的慢大约一周左右的样子。
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baicaikua

补充下你用胶原酶消化的话3~4小时时间实在是太长了。过夜的话一般是冷消化。但是就我的很多实验结果看来，冷消化用处不大。

baicaikua

加培养基再剪是因为组织块剪刀后面太粘稠，加点培养基稀释下好剪点，华通氏胶没消化过，因为很好爬出来的。脂肪我用胶原酶消化过。能长出来还很好呢。不过消化时间比你短很多，浓度也低很多，是用恒温摇床消化的。组织不一定要等到全部消化没了才算消化好，组织还剩很多的时候，其实已经有很多脱落的细胞在消化液里面了。收集消化液里面的细胞就可以了

baicaikua

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  {$ }' S( _. [3 h/ r/ A$ A3~5天就能看到细胞怕出来有点太快了吧。

baicaikua

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4 h6 @. K( }2 m4 k1 ~8 u# {" a) Y7 t- G- U  l+ i" L
3~5天就能看到细胞怕出来有点太快了吧。

baicaikua

回复 听不到 的帖子0 j; t/ n3 E$ I9 d% v" S

" b' J3 l4 `8 |/ W$ J7 h4 e看不出来收集步骤有问题啊。我都1000RPM10MIN。。。而且就洗两次。消化后消化液变浑浊么？还是变的很粘稠，酶是不是OK的？收集消化液用筛网过滤么？过筛网前先加PBS稀释吹打下，要是粘度很高筛网可能会截流大量细胞，有时会有一半。。不过也不至于完全没细胞。。还是觉得消化时间太长，把细胞都消化掉了。

baicaikua

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很粘稠有类似果冻状么？稀释完后有没有用枪头吹打？消化3~4小时感觉还是长了1~2小时可以试试，不过就算3~4小时也不会完全没细胞啊。是不是消化液里粘稠的东西没吹开，包裹了细胞结果没离心下去？